嗜吞噬细胞无浆体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum),针对GenBank A.phagocytophilum 16S rRNA基因保守序列(JN558815),设计1对引物1-25F/183-205R。以已知引物EE1/EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段(205bp),构建含有16S rRNA基因的重组质粒,以质粒为模板构建了标准曲线。以1-25F/183-205R为荧光定量PCR引物,建立A.phagocytophilum荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明,该方法在6.4×10~3~6.4×10~8 copies/μL相关系数为0.99,显示出良好的线性关系;所建方法能特异地检出A.phagocytophilum,对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应;可检测到6.4×10~2 copies/μL的标准质粒DNA,比常规PCR敏感性高100倍;批内及批间变异系数均低于2.0%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16.67%。该研究为A.phagocytophilum临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础。     

不同剂量达虫净对山羊自然感染线虫的驱虫效果试验

按体重5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg不同剂量的达虫净对自然感染线虫的山羊进行拌料饲喂驱虫,同时用0.2mg/kg阿维菌素一次皮下注射作药效对照,并设空白对照组。分别于用药前及用药后第7天取粪便进行虫卵计数。用药后第2天起每天检查由粪便中驱出的虫体数至查不出为止。结果表明:各剂量组药物对肺线虫虫卵减少率分别为100%,100%,100%,83.3%,虫卵转阴率分别为100%,100%,100%,66.7%;对捻转血矛线虫等其他线虫虫卵减少率分别为88.9%,100%,100%,100%,虫卵转阴率分别为66.7%,100%,100%,100%。用药后第2天病羊开始排虫,第3天为排虫高峰,第4天排虫减少,第5天仅见有少量虫体,第6天以后未再见虫体排出。     

鹌鹑隐孢子虫流行病学调查及动物感染试验

为掌握畜禽隐孢子虫病在河南省的流行动态,作者于2003年用饱和蔗糖溶液漂浮法检查了郑州、焦作2市7个鹌鹑养殖场429份粪便样品,结果有5个鹌鹑场隐孢子虫感染为阳性,根据卵囊形态初步鉴定1种为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),另1种为火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis);总阳性率为14．69％(63／429),其中感染贝氏隐孢子虫的阳性率4．66％(20／429),火鸡隐孢子虫的阳性率为10．02％(43／429),并分别用2种卵囊试验感染鹌鹑和雏鸡研究其致病性,观察了2种隐孢子虫在鹌鹑体内的排卵囊规律,以及火鸡隐孢子虫在免疫抑制雏鸡和非免疫抑制雏鸡体内的排卵囊规律。     

兔球虫病流行病学及其防治

<正>球虫病是家兔最常见且危害最严重的疾病之一,严重制约着养兔业的发展。兔球虫病是由艾美耳属(Eimeria)或等孢属(Isospora)的球虫寄生于兔的小肠或胆管上皮细胞内所引起的一种原虫病,给养兔生产造成很大的损失,是养兔生产中长期存在的一个难题[1]。各品种的家兔均易感染,1~3月龄幼兔最易感染,且感染后发病时间长,难控制。据聂奎等[2]报道,幼兔的球虫感染率为90%,死亡率为60%。耐过球虫病未死亡的,或经治愈的家兔成为长期带虫者,并成为该病的传染     

河南省部分地区仔猪球虫流行病学调查

应用饱和糖水漂浮法分别对河南省鹤壁、许昌、洛阳等地的3个种猪场、1个养猪专业户和一些散养户进行了仔猪球虫感染情况的调查。感染率分别为5．6％、15％、6．25％、5．36％、21．4％，平均感染率为8．78％。在上述所调查猪场中，仔猪球虫感染均为阳性。感染日龄主要集中在11～20日龄，感染率最高达33．3％，其次在1～10日龄，感染率为20％。主要球虫种类为猪等孢球虫(isospora suis)，其次为艾美耳属球虫，仔猪球虫感染在所调查地区具有普遍性。     

鹌鹑源火鸡隐孢子虫在小白鼠和雏鸡体内内生发育阶段的超微结构比较

用鹌鹑源火鸡隐孢子虫（Cryptos poridium meleagridis）卵囊分别感染昆明系小白鼠和固始雏鸡，用透射电镜和扫描电镜观察比较了C．meleagridis在两种试验动物体内的内生发育虫体超微结构和致病性的差异。利用扫描电镜观察发现，鹌鹑源火鸡隐孢子虫（C.meleagridis）在小白鼠和雏鸡体内的寄生部位有较大差异，在小白鼠体内寄生于十二指肠，但在雏鸡体内主要寄生于回肠；C．meleagridis深嵌于小白鼠肠微绒毛丛内，微绒毛较为完整；但在雏鸡回肠，C．meleagridis似黏附在肠黏膜表面，微绒毛脱落明显，对雏鸡致病性明显比对小白鼠的致病性强。利用透射电镜在两种试验动物的样品中均观察到不同发育阶段的滋养体、裂殖体和大配子体以及正在孢子化的卵囊。滋养体和裂殖体在发育过程中可明显见到粗面内质网结构，裂殖生殖中期阶段粗面内质网尤其发达；小白鼠体内的C．meleagridis虫体与肠黏膜接触处形成一凹陷，寄生部位较深，而在雏鸡体内无此现象。此外，利用透射和扫描电镜均观察到虫体寄生部位周围微绒毛密度高而且也比其它部位长。形成这些差异的原因有待于进一步探讨。     

鸡寄生虫病及其防治对策

1原虫病1.1球虫病球虫病是危害禽类的寄生虫病之一,流行范围广、传播速度快、死亡率高,各种禽类对球虫都有易感性,对养禽业构成很大威胁。据调查,河南地区鸡群的球虫感染率平均为60%左右,其中集约化鸡场的球虫感染率达到80%。     

猪囊尾蚴特异性单克隆抗体的制备及其识别抗原成分的鉴定

通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。     

脑囊虫病抗体检测方法研究进展

囊虫病是由猪带绦虫幼虫——猪囊虫引起的一种重要的人畜共患病。猪囊虫可寄生于猪、野猪、人、骆驼、猫等动物的肌肉、大脑、皮下和眼部等多个器官等,能引起不同程度的发病。仔猪患该病后发育不良,肉品质下降。人感染囊虫会引起不同部位的病变,其中最为严重的是脑囊虫病,它主要是由于人摄入猪带绦虫虫卵或猪带绦