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为了验证EgM123表达蛋白的免疫原性功能,建立犬细粒棘球绦虫EgM123基因的原核表达和蛋白纯化体系,为EgM123蛋白单克隆抗体制备与基因重组疫苗的研制提供研究基础。本试验通过构建EgM123基因原核蛋白表达载体及其蛋白表达条件优化、利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化、SDS-PAGE(聚丙烯酰氨凝胶电泳)和Western blotting(蛋白质印迹)试验对表达蛋白的分子量和免疫原性进行检测,并通过间接酶联免疫吸附(ELISA)方法对所表达的EgM123蛋白的抗原功能进行验证。本试验通过菌液聚合酶链式反应(PCR)扩增和双酶切验证成功构建EgM123基因原核蛋白表达载体;优化出最佳诱导条件为37℃、表达时间为7h下表达量最高;Western blotting显示其在28KDa处均有特异性条带;ELISA显示纯化后的蛋白能很好的与EgM123多克隆抗体结合。上述结果表明EgM123表达蛋白极具免疫原性,可用于免疫BALB/c小鼠制备EgM123单克隆抗体。 相似文献
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新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
采用PCR技术,从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tams1基因,该基因长度为846 bp,编码281个氨基酸.同源性分析表明,该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93.6%~99.8%,氨基酸同源性为88.6%~99.6%.系统发育进化树分析表明,新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致,与苏丹株和巴林株进化途径相差较远.氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇. 相似文献
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对本实验室2011年受理检测的92个规模化和散养猪场猪瘟、口蹄疫等血清学监测和流行病学调查信息分析,结果表明,猪瘟平均免疫抗体合格率为76.86%,口蹄疫免疫抗体合格率为60.82%,猪伪狂犬病免疫抗体合格率为51.75%,猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体合格率为55.52%。结合临床诊断及实验室检测,部分猪场存在胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、链球菌、副猪嗜血杆菌等感染,胸膜肺炎放线杆菌抗体阳性率为48.10%,猪圆环病毒抗体阳性率为53.21%,链球菌抗体阳性率为48.89%,副猪嗜血杆菌抗体阳性率为25.58%。 相似文献
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新疆高致病性猪蓝耳病病毒分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
从新疆发病仔猪的肺脏和淋巴结内体内分离到1株PRRSV病毒.该病毒能直接在Marc-145细胞上生长,继代培养72 h后产生细胞病变(CPE).经特异性荧光抗体和ELISA检测均为阳性,RT-PCR方法能扩增出该病毒的400 bp的特异性片段.从该病的流行病学、临床症状、病理学、病原的生物学特征来看,该分离株为猪繁殖与呼吸综合症病毒的变异株.这一结果提示PRRSV毒株变异是引起新疆地区猪场母猪、仔猪大量发病死亡的重要原因,必须引起各级兽医部门和猪场的高度重视. 相似文献
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采用RT-PCR技术,分别对PRRSV新疆分离株XJ-a,XJ-b,XJ-c的ORF5片段的ORF5基因进行扩增,获得长度为603 bp的特异性目片段.ORF5片段序列分析表明,新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56.1%~56.4%,与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86.6%~87.2%,与国内部分省市流行株的同源性在96.0%~99.2%.PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株,属同一亚型,毒株间也存在一定的差异,具有高度致病性的生物学特征. 相似文献
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新疆牛环形泰勒虫Tamsl基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:2,他引:2
采用PCR技术,从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tamsl基因,该基因长度为846bp,编码281个氨基酸。同源性分析表明,该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93.6%~99.8%,氨基酸同源性为88.6%~99.6%。系统发育进化树分析表明,新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致,与苏丹株和巴林株进化途径相差较远。氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇。 相似文献
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