用免疫抑制小鼠快速培育抗苏拉明伊氏锥虫

将伊氏锥虫克隆ＪＧｍｃ５用环磷酰胺处理的免疫抑制小鼠频繁地连续传代，并予以亚治疗剂量的苏拉明治疗，连续传代１４次，历时８８日，即获得对苏拉明具有高水平抗药性的伊氏锥虫群体。在用免疫活性正常的健康小鼠测定抗药性时，此抗苏拉明锥虫群体仍保持高水平的抗药性，ＣＤ１００＞４００ｍｇ／ｋｇ。在以体外药敏试验测定时，其ＩＣ５０为１２３．２μｇ／ｍｌ。实验结果表明，宿主免疫系统的损害，在实验条件下，可导致伊氏锥虫迅速产生抗药性。在野外条件下，机体免疫系统的损害对锥虫抗药性的产生可能也起一定作用。     

布氏锥虫伊氏亚种和马媾疫亚种在不同气相条件下的体外培养

在烛缸和密闭培养的气相下,用我们改良的Baltz无细胞培养系统培养了3个已适应于体外培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株、1个布氏锥虫马媾疫亚种虫株和3个未经培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株(未适应株),并与常规CO_2培养箱(含5%CO_2的空气)培养作比较。所有适应株和未适应株均可在烛缸和密闭培养条件下正常生长,连续培养1—2月,虫体形态、生长特性和对小白鼠的致病力与CO_2培养箱培养相同。培养物的虫密度,密闭培养明显高于烛缸和CO_2培养箱培养,CO_2培养箱培养一般稍高于烛缸培养。密闭和烛缸培养的成功,对普及锥虫体外培养技术有很大实用价值,也提示应进一步研究培养的最佳气相条件。此外,不经饲养层培养系统适应直接建立3个未适应株的无细胞培养系统的培养也是重要进展。     

大庆冷棚葡萄定植前必须做好的几个关键技术环节

根据大庆市政府《大庆市关于加快发展棚室经济,推进"菜篮子"工程建设三年规划纲要》和有关文件精神,大庆市预计在2013年之前建设30万栋棚室。在政府的大力扶持和广大农户的努力下,设施葡萄栽培面积发展迅猛,仅八井乡就有冷棚葡萄4 300多栋,栽培管理水平高的农户,平均     

基因芯片技术在钩端螺旋体病传染源监测中的应用

为了将合成的核酸探针点样到玻片 上制备成基因芯片,先用常规PCR扩增动物 组织中钩端螺旋体特异片段,再用Cy3标记 引物,通过不对称PCR获取荧光素标记的靶 序列,然后与制备的芯片杂交,扫描仪记录结 果。同时,以PCR技术为对照,进一步观察 基因芯片技术检测动物传染源中钩端螺旋体 的特异性、敏感性及可行性。常规PCR扩增 问号钩端螺旋体阳性标本,出现单一482bp 的扩增产物,而双曲钩端螺旋体及其他螺旋 体、病原、正常动物组织均无任何DNA扩增 条带,芯片杂交结果与常规PCR方法结果一 致。用芯片和PCR对动物组织中不同浓度 钩端螺旋体的检测,最低检测浓度分别为10 条和100条钩端螺旋体,芯片检测的敏感性 高于常规PCR法。用基因芯片与PCR分别 对标本进行检测,5只人工感染的豚鼠肾、 肝、心、血等组织的检测结果均为阳性;28份 疫区野鼠肾标本阳性结果分别为8份和4 份,10份可疑病猪肾标本阳性结果分别7份 和5份;5份非疫区野鼠肾、5份正常猪肾标 本以及其他微生物的检测结果均为阴性。结 果表明,基因芯片技术可快速、灵敏、特异地 检测动物传染源中问号钩端螺旋体。     

应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

应用斑点酶联免疫吸附试验检测水牛伊氏锥虫抗体

应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测水牛伊氏锥虫IgG抗体,并与间接血凝试验(IHA)进行了比较。检测160份伊氏锥虫疫区水牛血清160份,Dot—ELISA和IHA的阳性率分别为55.63％和53.75％;其中42份虫检阳性血清的阳性率分别为100％和92.86％,两种试验的一致率为95.63％。两种试验的滴度呈显著正相关(r=0.8842)。10份非疫区健康水牛血清两种试验均为阴性。     

伊氏锥虫在27℃和41℃的体外培养

用改良Ｂａｌｔｚ无细胞培养系统在２７℃和４１℃培养伊氏锥虫，２７℃培养取得成功，４１℃培养失败。２７℃培养已持续１０个月，培养的伊氏锥虫仍保持其在哺乳动物宿主内的主要形态特征，对小鼠的感染力和致病力，消耗葡萄糖，葡萄糖分解的最终产物为丙酮酸；其群体增倍时间约为２４ｈ，ＤＥＡＥ－纤维素分离的回收率仅５０％左右，显著长于和低于３７℃培养物。文内还讨论了２７℃培养伊氏锥虫的用途和意义。     

用DEAE—纤维素柱分离伊氏锥虫

本文报道了用国产DEAE—纤维素从人工感染伊氏锥虫的小鼠、大鼠和犬的血液分离伊氏锥虫的具体方法,测定了压积DEAE—纤维素对小鼠、大鼠和犬的血液吸附值分别为0.25～0.41、0.23～0.39、0.33;伊氏锥虫的回收率,小鼠为83.19～98.19％,大鼠为84.87～93.85％。分离的锥虫形态正常,运动活泼,离心浓集后呈炼乳状,镜检无任何血细胞。此外,对用DEAE—纤维素分离伊氏锥虫的有关技术问题作了讨论。