热休克蛋白27通过调节氧化应激影响奶牛胎衣不下发生机制研究

揭示热休克蛋白27(Heat Shock Protein 27,HSP27)可通过参与机体的氧化应激过程从而影响奶牛RFM发生的具体机制.采集奶牛胎衣不下(RFM)组及胎衣正常排出母体组的胎盘组织,应用WB及试剂盒检测HSP27的相对表达以及葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;还原型...     

姜黄素通过Nrf2信号通路对H2O2诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化应激的缓解

【目的】验证姜黄素是否能够通过转录因子E2相关因子2（Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）信号通路减轻H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激,为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的氧化损伤提供理论依据。【方法】培养奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）,用500 μmol·L^-1H₂O₂处理MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L^-1）处理3 h;MAC-T细胞转染Nrf2 siRNA 48 h后,用500 μmol·L ^-1 H₂O₂处理奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L^-1）处理3 h。采用实时定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot,WB）和试剂盒等方法,检测Nrf2的蛋白表达量及下游靶基因NAD（P）H醌氧化还原酶1（NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1）和血红素加氧酶1（Heme oxygenase 1,HO-1）的mRNA及蛋白表达量和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）等氧化应激相关指标的活性及含量。【结果】（1）H₂O₂处理组MAC-T细胞中MDA含量显著高于对照组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著低于对照组（P<0.01）。15 μmol·L^-1姜黄素+H₂O₂共同处理组和30 μmol·L^-1姜黄素+H₂O₂共同处理组MAC-T细胞中MDA的含量显著低于H₂O₂处理组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著高于H₂O₂处理组（P<0.05,P<0.01）。（2）H₂O₂处理组总Nrf2蛋白水平显著低于对照组（P<0.01）,H₂O₂处理组Nrf2下游基因HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著低于对照组（P<0.01）。姜黄素处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.01）,姜黄素处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于对照组（P<0.01）。姜黄素+H₂O₂处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于H₂O₂处理组（P<0.01）,姜黄素+H₂O₂处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于H₂O₂处理组（P<0.01）。（3）si-Nrf2组与对照组相比,Nrf2的mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。si-Control+H₂O₂+姜黄素组与si-Control+H₂O₂组相比,MDA的含量显著降低（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著升高（P<0.01）。si-Nrf2+H₂O₂+姜黄素处理组与si-Control+H₂O₂+姜黄素组相比,MDA的含量显著升高（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px活性显著降低（P<0.01）。【结论】姜黄素可以通过增加Nrf2的表达,诱导下游抗氧化分子的转录从而缓解H₂O₂诱导奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激。本研究为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤提供理论依据。     

NEFA对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子基因表达的影响

分析NEFA对奶牛子宫内膜上皮细胞内细胞凋亡相关因子mRNA表达的影响.培养奶牛子宫内膜上皮细胞,用CCK-8法检测不同浓度NEFA刺激不同时间后的细胞活性,以筛选出合适的NEFA刺激浓度和时间,再采用qRT-PCR法检测NEFA刺激子宫内膜上皮细胞后细胞凋亡相关因子caspase-3、caspase-8、Bcl-2、...     

NEFA经MMPs途径对奶牛子宫内膜上皮细胞Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

为了研究体外非酯化脂肪酸(NEFA)对奶牛子宫内膜上皮细胞基质金属蛋白酶(MMPs)、Ⅳ型胶原蛋白(COL-Ⅳ)和炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)分泌的调节作用,进而探讨NEFA对奶牛胎衣不下(RFM)发生的影响,使用不同浓度的NEFA刺激牛子宫内膜上皮细胞,采用qPCR和Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、COL-Ⅳ、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平。结果表明,与对照组相比,低浓度组和高浓度组的MMP-2和COL-Ⅳ的mRNA表达极显著升高(P<0.01),MMP-9的mRNA极显著下调(P<0.01);IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达在高浓度组均极显著上调(P<0.01),在低浓度组,IL-6的mRNA被极显著上调(P<0.01),IL-8和TNF-α的mRNA被显著上调(P<0.05)。Western blot的结果显示,与对照组相比,高浓度组的MMP-2和COL-Ⅳ的蛋白表达极显著上升(P<0.01),MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05)。结...     

番茄红素缓解酮病奶牛氧化应激的作用

利用血酮仪选取40头临床型酮病奶牛作为试验组,一共分成4组。Ⅰ组为酮病对照组,Ⅱ组为饲喂番茄红素低剂量组(0.6 g/d),Ⅲ组为饲喂番茄红素中剂量组(1.2 g/d),Ⅳ组为饲喂番茄红素高剂量组(2.4 g/d),每组10头奶牛灌服7 d,另选取10头饲养条件相同的奶牛作为健康对照组。用试剂盒对各组奶牛血清中的氧化应激、肝功能以及能量代谢指标进行检测。结果显示,与酮病对照组相比,番茄红素低、中、高剂量组中,T-AOC、GSH-Px、CAT和SOD活性显著增长,MDA含量显著减少;GLU含量显著升高,而BHBA、BUN、ALP、ALT、AST、DBil含量显著降低。结果表明,番茄红素可以缓解酮病奶牛的氧化应激、能量负平衡以及肝脏损伤,为缓解奶牛酮病提供一条新的思路。