鸡卡氏白细胞虫病的诊治

鸡卡氏白细胞虫病是由卡氏白细胞虫寄生于鸡的白细胞(主要是单核细胞)和红细胞而引起的一种血液原虫病。本病在我国各地均有发生,常呈地方流行性,对养鸡生产危害严重。本病有明显的季节性,一般发生在库蠓孳生的夏季。2004年5月份,广东某鸡场发生了一起鸡卡氏白细胞虫病,现将诊治情况报道如下。1发病情况及临床症状江门市某集约化鸡场饲养38～50天龄中鸡2万多只,70～90天龄大鸡1万只。5月15日大鸡舍中部分鸡只精神沉郁,鸡群食欲稍微下降,每天死亡5～6只,开始以为是由热应激所致,这种情况持续了3天。到5月18日,鸡群食欲明显减退,全群采食量减…     

H1N1亚型猪流感病毒的生物学特性测定及其HA基因序列分析

测定了A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)猪流感病毒的部分生物学特性;运用RT-PCR方法扩增其HA基因,并对其进行了克隆和序列分析。结果表明,该株病毒的EID50/0.2 mL及TCID50/0.1 mL分别为10-2.3和10-2.1,小鼠感染试验亦说明该病毒具有致病性。序列分析表明,HA基因全长为1 701 bp,与国内外流行株同源性达90.8%~99.0%。     

牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.     

仔猪大肠杆菌病病原分离鉴定及药敏试验

从广东某猪场严重腹泻的仔猪中采集12份仔猪黄痢、白痢粪便样品,共分离出6株大肠杆菌.药敏试验结果表明,所分离到的6株大肠杆菌对头孢噻肟、头孢拉啶、诺氟沙星等药物最敏感,可作为防治该猪场仔猪大肠杆菌病的首选药物.利用所分离菌株研制出灭活铝胶菌苗注射产前母猪,其后代仔猪的黄、白痢发病率大大降低.     

东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达

本试验旨在通过克隆东北虎γ-干扰素(IFN-γ)基因,研究其分子特征并预测蛋白生物学功能,为后续研究干扰素抗病毒活性做前期准备。通过RT-PCR从ConA诱导过的东北虎血淋巴细胞中扩增东北虎IFN-γ基因并测序,应用生物信息学方法进行序列分析。结果表明:东北虎IFN-γ编码区由504个核苷酸组成,共编码167个氨基酸,蛋白相对分子质量为19.59 ku,等电点为9.03,所编码的蛋白为碱性亲水性蛋白,其中前23个氨基酸可能为信号肽,IFN-γ编码蛋白保守结构域为IFN-γ超家族,且存在跨膜结构,其中1-6位氨基酸为胞内区域,7-28位氨基酸为跨膜区域,29-167位氨基酸为胞外区域;IFN-γ编码蛋白二级结构主要以α-螺旋(58.08%)和无规则卷曲(33.53%)为主,存在5个潜在的B细胞抗原表位,3个潜在的N-糖基化位点;分子进化分析显示,东北虎IFN-γ与GenBank上发表的东北虎、非洲狮、金钱豹、美洲狮、猎豹、家猫、加拿大猞猁、野猪等的核苷酸相似性为80.4%~99.8%,氨基酸相似性为70.5%~100%,东北虎IFN-γ与非洲狮、金钱豹亲缘关系最近,美洲狮、猎豹、家猫、猞猁次之,野猪最远。通过合成改造后的东北虎IFN-γ基因,构建能表达IFN-γ蛋白的重组质粒pPIC9K-IFN-γ,将其导入高效表达系统-毕赤酵母中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达蛋白的分子量约17.8 ku,与预期大小相符,表明东北虎IFN-γ成功表达。     

表达IBDV VP2免疫原的HVT重组体接种雏鸡对IBDV攻击的…

构建了表达了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２的两种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）重组体ｖＨＶＴ００１和ｖＨＶＴ００２。用其接种１日龄雏鸡以评价它们对ＩＢＤＶ５２／７０株和马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＲＢ１Ｂ株攻击的保护效果。在ＩＢＤＶ攻击中，ｖＨＶＴ００２免疫鸡能预防死亡和法氏囊肉眼病变，具有良好的保护力，以１０＾５ＰＦＵ免疫能达１００％、１０＾４ＰＦＵ免疫能达６０％保护，而用ｖＨＶＴ００１免疫只获得较低     

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA，扩增了MPT83基因，并克隆入pMD-18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21（DE3）宿主菌，IPTG诱导表达，用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序，构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen-Bank中的序列一致；构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHI＋HindⅢ双酶切鉴定构建正确；经SDS-PAGE分析，在约42ku处出现新的蛋白条带，4h后表达量即达到高峰；Westernblotting分析表明，融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别；纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳，出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。