PEDV N蛋白的原核表达纯化及B细胞抗原表位预测分析

本研究旨在对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N基因进行克隆构建、表达与其B细胞抗原表位性质的预测。将PEDV的N基因进行PCR扩增,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经酶切验证获得阳性克隆,将阳性克隆在表达菌E. coli BL21(DE3)中表达。通过对表达条件及纯化条件的优化,获得高纯度表达蛋白。利用生物信息同源模型化软件Swiss-Pdb Viewer建立PEDV-N蛋白的3D结构,并根据生物信息学软件DNA-Star预测PEDV-N蛋白的二级结构、抗原性、亲水性和表面可及性分析,综合分析预测其B细胞抗原表位。经预测PEDV-N蛋白氨基酸序列中存在13个B细胞优势抗原表位区域。研究结果将进一步为PEDV-N蛋白体外表达产物的应用及研制基因工程疫苗提供理论基础。     

牛源ATG13的克隆表达及功能分析

细胞自噬是细胞的一种自我保护机制。本研究选取牛源autophagy related gene 13(ATG13)为研究对象,通过分子生物学方法,对ATG13蛋白进行了鉴定与分析。原核表达及Westenblot鉴定发现,ATG13基因编码的蛋白大小为53k D左右。研究结果为研究牛源ATG13蛋白的生理功能及调控机制积累了前期实验数据,同时为生物医学与生物材料学领域中进一步开发利用牛源ATG13蛋白奠定了基础。     

限时喂养对DNA疫苗免疫效果的影响

目的：近年来,限时喂养被广泛关注,在成功构建H1N1流感病毒血凝素(HA)的重组质粒pcDNA3.1(+)-HA的基础上,将其作为DNA疫苗注射BALB/c小鼠,比较限时喂养对小鼠免疫效果的影响。方法：将DNA疫苗按照25 μg剂量肌肉注射小鼠,并对其进行限时喂养,2周后加强免疫,免疫2周后通过红细胞凝集抑制试验、脾细胞刺激试验,观察小鼠体液及细胞免疫的变化。结果：经验证,限时喂养在一定程度上可以增强小鼠免疫功能。     

HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

目的：为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑。方法：应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1 (+)-HA),经双酶切鉴定后,转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot方法观察该重组质粒在293T细胞中的表达情况。结果表明,pcDNA3.1 (+)-HA重组质粒构建成功;与空白及阴性对照相比,转染293T细胞48 h后的HA mRNA水平显著上升(2.4×10³,P<0.000 1),并能在293T细胞中成功表达,为深入研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响奠定了基础。     

牦牛乳对实验室常用大肠杆菌菌株生长的影响

为了解添加牦牛乳对大肠杆菌生长的影响,将采集的牦牛乳经冻干稀释后加入实验室常用基因工程菌BL21和DH5α的培养基中,通过体外菌液培养试验测定不同浓度牦牛乳对大肠杆菌生长的影响。结果表明：在氨苄青霉素抗性和无抗性的大肠杆菌BL21和DH5α培养过程中,外源加入5 mg/ml的牦牛乳对四种大肠杆菌的生长有促进作用。     

抗生素混合使用对C57BL/6J小鼠肠道菌群破坏的研究

为探究抗生素对肠道菌群的破坏作用及肠道菌群失衡对机体的影响。本研究拟以C57BL/6J小鼠为研究对象,建立一个肠道菌群失衡的小鼠模型,并结合空腹血糖、血平板检测结果,通过综合分析实验结果,鉴定抗生素对小鼠肠道菌群的破坏作用,为以后抗生素的合理使用提供理论依据。在抗生素的干预下,小鼠的肠道菌群数量减少,空腹血糖降低。抗生素滥用会导致小鼠肠道菌群遭到破坏,从而致使机体其他机能失衡。