利用双向电泳技术分析山羊精子冷冻前后蛋白组的差异

建立稳定的山羊精子蛋白质双向电泳的技术平台，对精子上样量、蛋白质提取方法、二维电泳程序等相关技术都进行了优化，得到了相对清晰的冻精和鲜精的二维电泳图谱，并运用ImageMaster TM 2D Platinum软件进行了分析。结果表明：通过改进的热Trizol法提取山羊精子蛋白，当取精子3×10^7、上样量为150μL时能取得较好的电泳图谱，鲜精的蛋白位点重复性较高的有650个±10个，冻精的蛋白位点重复性较高的有600个±10个。冷冻导致精子蛋白丢失约50个，而且冻精多表现为大分子量蛋白的丢失，大部分分布于60～100kb之间，其中60～80kb之间蛋白丢失约18个，80～100kb之间蛋白丢失近20个，12～60kb之间蛋白丢失近12个。实验初步探明了山羊精子融冻前后精子的蛋白变化规律，为进一步了解精子冷冻损伤的确切机理奠定了基础。