仔猪病毒性腹泻疫苗免疫效果比较

为探讨商品化猪病毒性腹泻三联弱毒疫苗和二联灭活疫苗对仔猪免疫效果的影响,通过前期妊娠母猪跟胎免疫,随机选择胎次相近、无病史新生仔猪80头,随机分成3个试验组和1个对照组。对照组不免疫;试验组仔猪于28日龄首免和65日龄二免三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗,应用ELISA试剂盒进行血清抗体检测。结果表明:试验组抗体阳性率均高于对照组(P0.01),试验组间抗体阳性率第3组高于第1组和第2组(P0.05),腹泻疫苗在母猪妊娠期接种对仔猪表现出一定的保护力,交替免疫三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗效果最佳。本研究为猪病毒性腹泻疫苗免疫提供可行依据。     

村级动物防疫体系建设初探

我国动物防疫体系建设始于20世纪50年代,在相当长的一段时期,由于养殖总量不大,规模小,畜禽商品率不高,对动物防疫体系的要求也相对较低,动物防疫体系建设也就相对滞后。改革开放后特别是在上世纪末本世纪初,     

基于实时荧光定量PCR技术的猪伪狂犬病活疫苗含毒量评价

为定量分析贵州省临床用猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)活疫苗中病毒含量,根据GenBank中公布的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因序列(登录号:M17321.1)设计1对特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对来自6个不同厂家的猪伪狂犬病活疫苗进行含毒量分析。结果显示,试验成功建立了可用于PRV检测的实时荧光定量PCR方法,标准曲线中标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值呈良好的线性关系,标准曲线方程为:Y=-0.97X+33.66(R~2=0.999),该方法最低检测病毒含量为3.19×10~1拷贝/μL,敏感性高且具有良好的重复性和特异性。应用所建立的实时荧光定量PCR方法对贵州省临床用6个厂家生产的猪伪狂犬病活疫苗的病毒含量进行检测,结果显示,6种市售猪伪狂犬病活疫苗(A～F)中病毒含量分别为1.67×10~7、4.83×10~5、2.64×10~6、4.27×10~7、3.39×10~6和3.68×10~5拷贝/μL,来自不同厂家的疫苗病毒含毒量存在明显差异,最大差异可达116倍,其中来自A、D厂家的两种猪伪狂犬病活疫苗具有较高的含毒量。本试验所建立的实时荧光定量PCR方法可用于猪伪狂犬病活疫苗病毒含量的快速检测和评价,对猪伪狂犬病活疫苗的质控和临床用疫苗选择具有一定的指导意义。     

山羊痘病毒贵州分离株P32基因的克隆及序列分析

山羊痘(goat pox)是由羊痘病毒属(capripox-virus)山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)引起的一种主要危害山羊的高度接触性传染病[1]。本试验应用PCR技术,从山羊痘病毒DNA中扩增P32基因,通过pMD18-T克隆载体转化到DH5α工程菌中,并进行重组质粒的鉴定,旨在探索山羊痘病毒贵州株与国     

奶牛隐性乳房炎的细菌学检测与药敏试验

对贵州省某奶牛场采集的155份奶样进行了病原菌的分离培养及生化鉴定,并对主要病原菌做纸片法药敏试验,结果表明:147份奶样有细菌生长,细菌检出率为94.84%(147/155);共分离到335株细菌,其中葡萄球菌和链球菌为主要病原菌,占81.79%(274/335);主要致病菌对先锋霉素、利福平、丙氟哌酸等五种药物敏感。     

Marc145细胞源EDC3基因的克隆及其生物信息学分析

为获得Marc145细胞源EDC3基因序列,分析其序列特征及编码蛋白的结构和功能,本试验采用RT-PCR方法从Marc145细胞中扩增EDC3基因,并进行克隆和序列测定;应用DNAStar软件分析该基因的核苷酸和氨基酸序列,与参考序列经BLAST比对后分析同源性,并构建系统进化树;利用生物信息学方法对其编码区蛋白进行二级结构、三级结构、B细胞表位、跨膜结构域和信号肽预测。结果显示,Marc145细胞源EDC3基因长度为1 527bp,共编码507个氨基酸;EDC3基因编码区核苷酸序列与绿猴、猕猴、狒狒、人、倭黑猩猩、马、野猪、虎鲸、绵羊、非洲象和大熊猫的同源性在91.5%~99.2%之间,与非哺乳动物原鸡同源性最低,仅为81.2%;EDC3氨基酸序列与上述物种的同源性在95.3%~99.6%之间,与原鸡的同源性仅为88.8%。系统进化树结果显示,Marc145细胞源EDC3基因与绿猴的亲缘关系最近,其次是灵长类。蛋白结构预测结果表明,EDC3蛋白主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,分别为23.38%和47.35%,二级结构与三级结构预测结果相符。该蛋白存在多个B细胞优势抗原表位,无跨膜结构域及信号肽区域。本试验结果可为Marc145细胞源EDC3基因功能的进一步研究提供参考。     

山羊源产单核细胞李斯特菌的分离与鉴定

从贵州省盘县某养羊场病例组织样本中分离出1株疑似产单核细胞李斯特菌(Lm)。通过革兰染色、生化鉴定、PCR扩增hly基因、克隆、测序、序列分析及药敏试验等方法对可疑菌株进行分析鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌落形态、菌体形状特征、生理生化特征均与文献报道的产单核细胞李斯特菌相同,并从该分离菌株基因组中扩增到大小约850bp的Lm的特异性DNA片段,其序列与GenBank中其他Lm地方株核苷酸同源性在39.1%~99.7%之间,其中与从发病动物分离到的加拿大、瑞士参考株同源性最高,均达到99.7%,与其他途径分离到的参考菌株同源性都很低,分子水平上进一步证实分离菌株为产单核细胞李斯特菌,且从不同途径分离的地方株hly基因差异大。研究结果为本病临床防控与治疗提供理论依据。     

基于测序技术的贵州主要品种羊TLR2基因多态性分析

为了解贵州省不同品种羊TLR2基因序列的多态性特征,本研究以不同品种羊血液DNA为模板,对TLR2基因完整ORF进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,5种羊TLR2基因扩增长度均为2 355 bp。对贵州黑山羊、黔北麻羊、贵州白山羊、波尔山羊和湖羊5种羊TLR2基因进行种内比对结果显示,贵州黑山羊、黔北麻羊、波尔山羊种内TLR2基因序列保守,贵州白山羊种内A1732T位点存在多态性,湖羊种内在G1133A、T1162G、A1949G等位点存在基因多态性;种间比对结果显示,4种山羊有16个核苷酸位点存在多态性,其中有10个错义突变。4种山羊与湖羊进行比对结果显示,湖羊存在较多的多态性位点,其中有11处位点的差异导致氨基酸的变化。蛋白质结构预测分析显示,不同品种羊TLR2基因呈现的错义突变位点引起了其蛋白质二级结构和三级结构的变化,提示可能存在TLR2参与免疫相关信号通路水平的变化。本研究填补了贵州地方山羊品种TLR2基因多态性空白,为探究TLR多态性与羊疫病易感性关系提供基础研究资料。     

贵州省猪传染性胸膜肺炎的抗体检测与病原鉴定

根据《贵州省畜禽疫病志》的资料，1992年以前，我省没有发生猪传染性胸膜肺炎的病例记载。近年来，随着畜牧养殖业的迅速扩大，生产方式向集约化与适度规模化发展．从国内外反复引种以及省内畜禽的频繁流动．在贵州省的一些种猪场中出现了传染性胸膜肺炎的临床病例。2005年8月，某种猪场2—4月龄的猪群发生一种疫病．主要表现咳嗽、生长停滞、体温在38～405。C之间。病情严重者喘气．甚至呈犬坐样，早晚呼吸困难症状加剧。4月龄以后临床症状逐渐缓解或消失。在疫病流行期间．曾采用氟苯尼考、土霉素等药物治疗效果不显著．遂将两头70日龄病猪送本实验室进行检查。剖检病变如下：心包与胸壁相粘连．心包膜增厚，不透明．心包腔内可见大量黄白色浑浊液体．含有乳糜样纤维素性渗出物。肺的膈叶出现多量实变区．心叶和尖叶分布较少，肺表面可见少量灰白色坏死结节和脓肿病灶。     

绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊肺脏和血液Toll样受体基因转录水平的影响

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体性肺炎,分析绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊Toll样受体(TLRs)基因转录水平的影响。应用TaqMan RT-qPCR对Mo人工感染的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊和波尔山羊的肺脏和血液样本TLRs基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种山羊感染Mo后,肺脏样本中贵州黑山羊和贵州白山羊TLR1/2/4/6/8/9/10基因、黔北麻羊和波尔山羊TLR4/6/7/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01),血液样本中贵州黑山羊TLR2/4/6/7/8/9基因、贵州白山羊TLR2/4/6/7/8基因、黔北麻羊TLR4/6/7/8/9基因、波尔山羊TLR4/6/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01);且发现不同品种山羊间TLRs基因的转录水平也存在显著差异,最先出现死亡的贵州白山羊、贵州黑山羊肺脏样本中TLR1/6/8/10基因转录水平上调倍数显著高于其余品种山羊(P<0.05),而TLR2/4/5/7/9基因转录水平上调倍数显著低于黔北麻羊和...