烟草扭脉病毒部分基因组特征及其分类地位分析

通过RT-PCR从烟草丛顶病发病烟株总RNA中获得烟草扭脉病毒（Tobacco vein distorting virus,TVDV）基因组部分序列。序列分析显示该片段全长1655bp,共包含TVDV的部分RdRp基因、完整的CP基因和完整的MP基因。其中RdRp基因与CP基因的间隔区（IR）长201nts,符合马铃薯卷叶病毒属病毒的归属依据;对RdRp、CP、MP基因以及IR序列的对比分析,显示了TVDV与黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属病毒的较高同源性。根据三个ORF编码的氨基酸序列构建的分子同源树的分析,也都显示了TVDV与黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属病毒的同源性最高,进一步证实了TVDV应该是黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属的确定成员。     

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅶ 激素的变化

采用植物激素ＥＬＩＳＡ测定试剂盒,对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素（ｉＰＡ和ＺＲ）与生长素（ＩＡＡ）含量的变化．结果表明：生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株,细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株,随后呈下降趋势并趋于稳定,Ｃ／Ａ值在病程中相对处于较高水平．     

p38MAPK抑制剂SB202190对猪颗粒细胞活力的影响

p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated potein kinase,MAPK)家族成员,是细胞内重要的信号转导系统之一,对细胞的生长、分化、凋亡具有重要影响及作用。为探究p38MAPK信号对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制,研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,在培养液中分别添加浓度为0、1、10、20μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB202190。以免疫细胞化学染色法鉴定体外培养猪卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测其增殖活性,应用Annwxin V-FITC/PI及细胞周期试剂盒染色检测细胞凋亡及细胞周期状况,以实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞中凋亡、周期相关基因的相对表达水平。结果表明,添加p38APK信号抑制剂SB202190可抑制体外培养猪卵巢颗粒细胞的增殖活性,20μmol/L处理组与其他组相比呈显著性差异(P0.05);20μmol/L SB202190添加处理未显著影响颗粒细胞的凋亡水平,而该浓度SB202190可将大部分细胞阻滞在G1/G0期,与对照组相比差异显著(P0.05);基因相对表达水平检测显示SB202190添加可抑制Fas、FasL、CDK-4的表达,而同时促进Bcl-2、Bax、P27的表达(P0.05),对Caspase-3的表达没显著影响(P0.05)。综上所述,SB202190通过调控猪卵巢颗粒细胞的周期来影响其增殖作用,但对其凋亡没有影响。     

不同编烟方式对烤烟烘烤质量的影响

2009年在云南省曲靖市了进行了不同编烟方式对烟叶烘烤质量的影响研究.结果表明:使用烟夹和编烟机编烟能够降低烘烤成本,提高烤后烟烟叶等级比例,增加经济效益,烤后烟外观质量指数和以烟夹的83.85最高,常规化学成分最接近优质烤烟适宜的范围,评吸综合效果以使用烟夹的烟叶最佳.综合各项指标,以烟夹编烟方式效果最佳,适宜在烟叶...     

一种改进的烟草丛顶病快速诊断方法

与病害特异的小分子RNA的检测是烟草丛顶病的主要诊断方法.本文报道了一种改进的与烟草丛顶病相关的小分子RNA的简便提取方法,在烟草丛顶病的快速、特异检疫中具有较好的应用前景.     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅳ建立标准毒株

 以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养,连续培育3代,以第3代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株,提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳.结果表明:第3代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症,并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA.说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存,成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株.     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅶ激素的变化

 采用植物激素ELISA测定试剂盒,对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素(iPA和ZR)与生长素(IAA)含量的变化。结果表明:生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株,细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株,随后呈下降趋势并趋于稳定,C/A值在病程中相对处于较高水平。     

Wortmannin抑制Wnt/β-Catenin通路对猪卵巢颗粒细胞发育的影响

为探究PI3K通路与Wnt/β-Catenin通路在猪卵巢颗粒细胞发育中的互作关系以及调控功能,以不同浓度(DMSO,0.1,1,1.5,3,5μM)PI3K通路抑制剂Wortmannin处理体外培养猪卵巢颗粒细胞48 h,CCK-8法检测猪卵巢颗粒细胞细胞活力,Western Blot法检测β-Catenin蛋白水平;5μM Wortmannin处理体外培养猪卵巢颗粒细胞48 h,实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞内类固醇生成、激素受体和细胞凋亡相关基因的表达。结果表明,Wortmannin处理猪卵巢颗粒细胞可抑制颗粒细胞细胞增殖活力,其中3μM和5μM Wortmannin,相对其他处理组,显著地(P0.05)降低细胞增殖活力;对应的,不同浓度的Wortmannin也阻遏Wnt/β-Catenin通路,对比其他组,3μM和5μM Wortmannin处理组抑制效果最显著(P0.05);实时定量PCR检测结果表明,5μM Wortmannin处理显著下调猪卵巢颗粒细胞CYP19A1(P0.001)和CYP11A1(P0.01)mRNA水平,抑制激素受体基因FSHR和LHCGR基因表达(P0.05),促进Caspase3(P0.05)和PTSG2(P0.01)表达。综上所述,Wortmannin抑制猪卵巢颗粒细胞Wnt/β-Catenin通路,诱导细胞活力下降,促进细胞凋亡,并且阻碍激素受体表达和类固醇激素合成。     

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ,大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ;病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ,种子中未检测到此ＲＮＡ;此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ;能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化,不具有类病毒结构特征,推测可能是病毒的基因组分;支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测,即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．     

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养,连续培育３代,以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株,提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症,并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存,成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．