豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究(摘要)

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒Ｎ株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对ＰＰＶＮ株弱毒苗的抗体反应。其结果如下 :用 4种不同剂量的ＰＰＶＮ株弱毒苗免疫豚鼠 ,免疫后 14天均产生抗体反应 ,ＰＰＶＨＩ价分别为 :0 1ｍｌ剂量为 1:16～ 1:6 4;0 2ｍｌ为1:8～ 1:32 ;0 5ｍｌ为 1:16～ 1:32 ;1 0ｍｌ为 1:16～ 1:6 4,而对照豚鼠抗体反应为阴性 ,可见仅需 0 1ｍｌＰＰＶＮ株弱毒苗便可引起豚鼠产生抗体反应。同时比较了不同批次的ＰＰＶＮ株弱毒苗接种豚鼠产生抗体反应的情况 ;3批ＰＰＶＮ株弱毒苗接种豚鼠后 14天全部出现抗体反…     

冻猪胃中鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

从一客户送检的冻猪胃中分离出一株细菌，经细菌分离培养，生化反应，梅里奥微生物自动分析仪检测以及血清凝集试验鉴定为鼠伤寒沙门氏菌，抗原式为4，5：i:1,2。该菌株致接种的小白鼠全部死亡；分离菌对先锋V，氟哌酸，环丙沙星，氯霉素高敏，对复方新诺明，青霉素，红霉素耐药。     

猪细小病毒PCR检测与分离研究

根据猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2基因序列,设计合成1对引物,建立了检测PPV的PCR方法。检测14份临床组织,检出阳性11份,阳性检出率为79.5%。阳性样品扩增产物用EcoRⅠ酶切得到了预期的结果,对PCR产物进行测序,测序结果与已发表的PPV基因核苷酸序列比较,同源性达99%~100%,所编码的氨基酸同源性为93%~100%。从PCR检测阳性的一份病料组织中分离出1株PPV。试验证明,建立的PPVPCR检测方法特异性强、敏感性高,适用于临床样品的快速检测。     

用B病毒ELISA和人单纯疱疹病毒Ⅰ型酶免疫法检测食蟹猴血清中B病毒相关抗体的研究

采用B病毒(BV)作为抗原的ELISA法和人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的酶免疫(EIA)法分别检测食蟹猴血清中BV抗体和BV相关抗体,结果BV ELISA法和HSV-1EIA法阳性检出率均为10．9％(5／46),两者符合率为100％。这一结果为食蟹猴的BV抗体监测和进出口检验提供参考。     

可视环介导恒温扩增技术检测实验猴小肠结肠炎耶尔森菌

本研究在传统环介导恒温扩增反应体系中引入羟基萘酚蓝指示剂,对反应体系进行高温-低温前处理和添加甜菜碱等优化措施提高试验敏感性,液面覆盖矿物油降低气溶胶污染,据此建立的猴小肠结肠炎耶尔森菌可视LAMP检测方法结果判定直观明了,敏感度为6 CFU/反应,无非异性。     

实验猴沙门菌可视环介导等温扩增检测方法的建立及应用

为了促进环介导等温扩增(LAMP)技术的推广应用,在传统LAMP反应体系中引入羟基萘酚蓝指示剂,建立可视LAMP方法,对反应体系进行高温-低温前处理和添加甜菜碱等优化措施提高检测敏感性,液面覆盖矿物油降低气溶胶污染,据此建立的猴沙门菌可视LAMP检测方法敏感度为6CFU/反应(25μL体系),结果判定直观明了,与其他细菌无非特异性反应,检验效率和检出率均优于细菌培养鉴定法。     

鸭疫里默氏杆菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用研究

根据GenBank登录的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白(OmpA)基因保守区序列,设计引物和探针,建立了直接检测鸭疫里默氏杆菌的实时荧光定量PCR快速方法。10倍梯度稀释RA菌株制备DNA模板测定方法的灵敏度,结果可在8.0×103CFU/mL浓度下特异地检测出目的菌,最低能检测到RA的DNA模板为8.0拷贝/μL;对鸭源大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌进行检测,结果均为阴性,建立的实时荧光定时PCR方法特异性强。用RA菌株人工感染雏鸭,感染后定时采集咽喉拭子、泄殖腔拭子、心血、肝脏、肺脏、脑,分别用实时荧光定量PCR检测,对脏器进行病原菌分离。结果表明,1/10半数致死量接种组,感染后8 h从心血、肝脏、脑组织检测到RA核酸,16 h后全部试样呈阳性;24 h首先从肝脏分离到RA,心血、肝脏、肺脏、脑组织均分离出RA。心血和脏器RA实时荧光定量PCR阳性检出率为63.8%(51/80),RA分离率为28.8%(23/80)。10个半数致死量接种组,1 h即可从咽喉拭子、心血和肝检测到RA核酸,5 h全部样品为阳性;5 h从肺和脑分离到RA。RA人工感染鸭的心血、肝脏、肺脏、脑实时荧光定量PCR阳性检出率为86.3%(69/80),RA分离率为60%(48/80)。用加热裂解法提取样品RA DNA只需30 min,建立的实时荧光定量PCR检测RA只需2 h,适用于RA的快速诊断、流行病学调查、种鸭引进隔离检疫、活鸭及其产品国内市场和进出口检验检疫。     

出口食蟹猴志贺氏菌的分离和初步鉴定

我们在对出口食蟹猴进行检疫过程中分离出一株细菌。经细菌培养、形态学观察、生化特性和血清学检测初步鉴定为志贺氏菌属的福氏志贺氏菌。进行了该菌株的药敏试验，对氧氟沙星、环丙沙星和头孢噻肟敏感，而对常用药丁胺卡那霉素和庆大霉素产生耐药。     

用狄高辛标记DNA探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒

用狄高辛标记ＤＮＡ探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ），检出结果表明，人工感染ＧＡ强毒第三天就可从５只鸡中的三只心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃检出Ⅰ型ＭＤＶ，第２５天５只鸡的脏器均能检出Ⅰ型ＭＤＶ。同时从感染第１０天就可从羽囊检出Ⅰ型ＭＤＶ，到第１５天羽囊检出阳性率１００％。     

野生猕猴STLV-1和B病毒抗体的检测

为了调查保护区野生猕猴是否感染猴的3种主要病毒,从广西某自然保护区一只濒死的野生猕猴抽取血液分离血清,分别应用猴3种病毒斑点酶免疫检测试剂盒检测,结果猴T淋巴细胞白血病病毒1型(STLV-1)和猕猴疱疹病毒I型(B病毒)抗体呈阳性,而猴免疫缺陷病毒抗体呈阴性.