贾第虫包囊壁形成及囊壁蛋白研究进展

十二指肠贾第虫(又称肠贾第虫或蓝氏贾第虫)是一种常见的人兽共患寄生性原虫,寄生于人、家畜和犬猫等多种哺乳动物的小肠,由其导致的贾第虫病被世界卫生组织列为危害人类健康但被忽视的疾病之一。贾第虫生活史简单,由具有致病性滋养体和感染性包囊两个时期组成。在不良环境(胆固醇缺乏、碱性pH和高浓度胆汁条件等)刺激下,贾第虫滋养体会分化形成感染性包囊。形成包囊对贾第虫的生存、病原传播和致病至关重要。贾第虫感染往往是由于宿主吞食了感染性包囊污染的食物和饮水所致。包囊壁是贾第虫包囊抵抗外界不良环境、维持其生存能力和感染活性的重要屏障。包囊壁约40%由蛋白质组成,其余为N-乙酰半乳糖胺等碳水化合物和脂类等。贾第虫包囊壁主要含3种囊壁蛋白(cyst wall protein, CWP):CWP1、CWP2和CWP3。囊壁蛋白不仅在维持包囊活力方面发挥重要作用,且在贾第虫病诊断、口服疫苗开发等方面具有重要价值。笔者综述了贾第虫包囊壁的组成和形成、包囊成囊的诱导及调节、囊壁蛋白在疾病诊断和疫苗方面的研究,以期为后续相关研究提供参考。     

十二指肠贾第虫谷氨酸脱氢酶原核表达及动力学分析

为探索十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase, GDH)在滋养体中的分布和酶动力学等生物学特性，对GDH进行了克隆并构建原核表达质粒pET-28a-GDH,然后转化至BL21(DE3) plysS感受态细胞中经IPTG诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析，以Ni²⁺亲和层析纯化。对纯化的重组GDH进行体外酶动力学分析并免疫小鼠制备多克隆抗体，最后用间接免疫荧光技术对滋养体中的GDH进行定位。结果显示，贾第虫GDH的编码序列长1 350 bp,试验成功构建pET-28a-GDH重组表达质粒并诱导表达，重组蛋白约为49.7 ku,且大部分以可溶性形式存在。ELISA和Western blot结果表明，贾第虫GDH具有良好免疫原性，获得的多克隆抗体具有较强特异性。间接免疫荧光定位显示GDH主要位于滋养体的胞质中。酶动力学研究结果显示，GDH最适反应pH约为9.3、最适温度约为42℃,对L-谷氨酸和NADP⁺的Km值分别为4.485 mmol...     

饲料禁抗背景下规模化猪场胞内劳森菌的流行病学调查

为掌握在饲料禁抗和养殖端限抗背景下规模化猪场胞内劳森菌的流行情况，为猪增生性肠炎的精准防控提供依据。该研究运用巢式PCR和间接ELISA方法对饲料禁抗后不同来源的粪便样品和血清样品进行检测。饲料禁抗背景下，对采自不同猪场695份粪样的巢式PCR检测显示，猪群胞内劳森菌的总体感染率为23.88%，保育猪、肥育猪和种猪感染率分别为16.56%、29.58%和24.63%。对饲料禁抗和饲养期间限抗猪群的跟踪调查结果为，保育猪在30、44、58、72日龄的感染率分别是16.67%、20.00%、50.00%和70.00%；后备母猪的感染率44.44%—66.67%。对338份不同猪场送检血清样品的ELISA检测显示，胞内劳森菌的抗体阳性率为42.6%，不同猪场的阳性率10%—75.90%。上述结果表明，现阶段我国规模化猪场胞内劳森菌PCR检测阳性率和ELISA检测的阳性率均处于较高水平。饲料禁抗以及饲养期间限抗的保育猪和后备母猪群跟踪调查的最高感染率分别达70%和66.67%，保育猪随着饲养日龄的增加感染率呈明显地升高趋势。因此，在饲料禁抗背景下，规模化猪场应更加重视猪增生性肠炎的防控。