动物支原体

支原体亦称霉形体，最早由Nocard和Roux(1898)由牛传染性胸膜肺炎病例中分离到，由于性质难以界定，遂将这一类微生物命名为类胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organisms)，简称PPLO，后归为软膜体纲(Mollicutes)支原体目。支原体目下没一科，支原体科，科内设两属：支原体属(Mycoplasma)，属内有120种；脲原体属(Ureaplasma)，属内有6种，常见的动物支原体属此两属。     

丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ N末端基因克隆与序列分析

脂蛋白LPPQ是丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。LPPQ N末端域具有良好的免疫原性，在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的LPPQ基因序列设计引物，用Pyrobest^TM高保真DNA聚合酶从MmmSC HVRI X株中扩增出了LPPQ N末端基因序列，并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示，HVRI X株的LPPQ N末端基因序列与国外发表的序列同源性为99．7％，由其推导的氨基酸序列同源性为99，1％，为脂蛋白LPPQ N末端基因体外表达奠定了基础。     

丝状支原体丝状亚种SC型中国不同地区分离株脂蛋白Q基因的分子特征

根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型（MmmSC）脂蛋白Q（LppQ）基因序列设计并合成一对引物，利用PCR扩增方法，从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI—X、BenI、QingI、MuI和模式株PG1中获得了LppQ基因1303 bp的片段，将该片段克隆到PMD18-T载体上，通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定，证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger’s双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定，获得了HVRI-X、Ben Ⅰ、oing Ⅰ、Mu Ⅰ株和模式株PG1 LppQ基因核苷酸序列。核苷酸序列比较结果显示，国内4个MmmSC分离株与GenBank公布的LppQ基因核苷酸序列同源性均在99．7％以上，氨基酸序列同源性均在99％以上；与模式株PG1的核苷酸序列同源性在99．7％以上，氨基酸序列同源性均在99．3％以上。，国内4个MmmSC分离株之间的核苷酸序列同源性均在99．7％以上，氨基酸序列同源性均在99．3％以上。对HVPI X株LppQ基因氨基酸亲私陛和蛋白表面可能性进行了分析，证实LppQN末端富含亲水氨基酸，比C末端更有可能定位在蛋白表面。     

丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建

根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型（MmmSC）LppQ基因序列设计引物，从MmmSC HVRIx株中扩增出了LppQN末端基因，并将其分别克隆到pUC18和pUC19上，利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG，经克隆与序列测定证实突变成功后，将已突变的LppQN末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，成功地构建了LppQN末端基因原核表达载体pET32a-LppQ，为其下一步体外表达奠定了基础。     

丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株LppB基因的克隆与序列分析

牛传染性胸膜肺炎（CBPP）是OIE公布的一类烈性传染病，死亡率在30％-80％之间。在19世纪，CBPP在世界很多地区呈地方流行，非洲至今仍地方流行。在20世纪上半叶，北美、澳大利亚、欧洲宣布消灭了CBPP，但近20年间南部欧洲重新发现CBPP流行。根据流行病学和临床观察，在欧洲暴发的CBPP的致死率要比发生在非洲的CBPP低。     

丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型（Mycoplasma mycoides subsp．MycoidesSC，MmmSC）毒株与PG1、Y—goat进行分子特征比较。全茵体蛋白电泳与PG1完全相同，而与Y-goat不同；PCR结果显示6个中国分离株与PG1、Y-goat都没有缺失8．84kb片段；LppB全基因序列比较发现与PG1同源性达99％，而与Y—goat同源性很低；多位点基因序列类型（Multilocus sequence types，MST）分析显示与非洲澳大利亚群完全相同。以上证据显示中国CBPP流行株应归属于非洲澳大利亚群。     

绵羊肺炎支原体PCR诊断方法的建立

由支原体导致的羊呼吸道传染病对养羊业的危害极为严重。过去对此的研究多集中于山羊支原体山羊肺亚种（M．capricolum subsp．capripneumoniae，mccp）。但是绵羊肺炎支原体（M．ovipneumonia）、山羊支原体山羊亚种（M．capricolum subsp．capricolum，Mcc）、丝状支原体山羊亚种（M．mycoides subsp．Capri，Mmc）、丝状支原体丝状亚种LC型（M．mycoides subsp．mycoides LC，MmmLC）精氨酸支原体（M．arginini）等都是导致山羊和绵羊肺炎的病原。     

我国部分省区牛传染性胸膜肺炎流行病学调查

牛传染性胸膜肺炎（Contagious bovine pleuroopneumonia CBPP）又名“牛肺疫”是由丝状支原体丝状亚种SC生物型（Mycoplas mamycoides subsp．Mycoides SC MmmSC）引起的一种亚急性或慢性、接触性传染病，其特征为纤维素性肺炎和浆液性纤维素性胸膜炎，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。该病在20世纪20年代传入我国，流行历史较久，分布甚广，危害严重。     

应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法

 【目的】丝状支原体丝状亚种SC（Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC，MmmSC）是引起牛传染性胸膜肺炎（contagious bovine pleuropneumonia，CBPP）的病原体。成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的，在自然感染和人工感染时，特异性免疫反应产生早，持续时间长，抗体滴度高，因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。【方法】由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸（Trp），而在细菌中则为终止密码子，故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRI Ⅹ的lppQ基因进行原核表达，利用重组抗原建立间接ELISA方法。【结果】序列分析表明，将lppQ基因第198位的A成功突变为G， 并将突变后的脂蛋白LppQ N端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，构建了原核表达载体。重组菌经诱导后，表达出了分子量约为42 kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白，纯化后蛋白质纯度高达95%，Western blot结果显示，重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35 ?g·ml-1，包被酶标反应板，优化反应条件，P/N为4.8（0.934/0.193）。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376，敏感性为95.8%（46/48）， 特异性为98.9%（161/163）。应用间接ELISA和补体结合试验（CFT）对来自3个省自治区3 817头份牛血清进行了检测。【结论】Kappa值为0.63，两种方法存在中、高度一致性。