“十二五”农业部重点实验室建设工作启动——将建立重点实验室228个、农业科学观测实验站269个

11月8日,＂十二五＂农业部重点实验室建设工作启动会在北京召开。农业部重点实验室建设工作的启动,标志着国家农业科技创新体系建设取得新的进展,制约我国农业科技进步的难题有望得到破解。     

出口宠物咀嚼食品安全卫生现状调查及应对措施研究

通过对浙江地区出口宠物食品产业的行业管理、企业管理、官方监督管理现状的调查,了解安全卫生现状,发现存在的问题,以进一步认清形势,最终提出促进企业改进安全卫生状况,检验检疫部门提升把关与服务水平的解决方法和措施。     

反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用

为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体无交叉反应;TaqMan和Eva Green荧光定量PCR对pCS20质粒标准品的最低检测限分别为17.4拷贝·μL^-1和1.74拷贝·μL^-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%。对420只钝眼蜱样本的检测显示,TaqMan和Eva Green荧光定量PCR的检出率分别为25.48%和29.29%,与套式PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为反刍动物埃立克体的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法。     

牛副结核病PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因序列设计特异性引物,对牛副结核分枝杆菌进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为246 bp,与预期扩增序列同源性为99.6%。该PCR检测体系的特异性强,不能在非副结核分枝杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为1 pg。该检测体系的成功构建为牛副结核病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

牛副结核分枝杆菌实时荧光定量 PCR 检测方法的建立

根据GenBank上公布的牛副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因保守区域序列设计合成1对特异性引物,建立了一套SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测牛副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis)的方法。以实验室构建的牛副结核分枝杆菌pMD-ISMav2阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,其相关系数为0.999。以构建的标准品为模板,进行了特异性和敏感性试验。结果显示,该方法检测布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌DNA均为阴性;最低可检测到相当于每微升1.96×10¹拷贝数的标准品阳性质粒。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感和快速等优点,可用于牛副结核杆菌病的监测。     

牛布氏杆菌PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31的基因序列设计特异性引物,对牛布氏杆菌样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为602 bp,与预期扩增序列同源性为99.7％;该PCR检测体系的特异性强,不能在非布氏杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.9 pg/μL。该检测体系的成功构建为牛布氏杆菌病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范项目启动

前不久,国家农业科技成果转化资金"鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范"项目启动会在山东省滨州市召开。"鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范"项目计划实施期为2年。该疫苗产品保存条件为2℃～8℃,有效期为24个月,降低了常规疫苗的保存条件,延长了保存期。     

反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用

为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR)，本研究以E.ruminantium p CS20基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，建立了E.ruminantium dd PCR方法。利用本研究建立的dd PCR方法检测E.ruminantium、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等，结果显示仅E.ruminantium出现特异性扩增，而与其他寄生虫均无交叉反应，特异性强；将p UC57-p CS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10-1拷贝/μL～1×105拷贝/μL)后，利用该dd PCR方法检测，结果显示，该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL，比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍，本实验建立的dd PCR方法敏感性高；批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%，重复性好。利用建立的dd PCR方法对50只钝眼蜱样品检测，结果显示，阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,dd PCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为1...