骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed基因的新方案

探索了在骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中有效地敲除floxed基因,更好地研究基因敲除引起的表型的新方案。由于传统方法往往导致floxed基因不能被Lys M-cre酶高效地敲除,阻碍了BMDMs在一些遗传学方面的应用。通过调整培养基的更换时间,及时补充新鲜的M-CSF,使用胰酶消化分盘,有效地提高了细胞得率,并增强了基因在BMDM中的敲除效率。与传统方法相比,新方案将BMDMs得率增加了1倍,每只小鼠能获得接近5×107个BMDMs。新方案也显著性地提高了巨噬细胞中m TOR基因的敲除效率,从36.77%±5.07%提高到了76.9%±7.83%。新方案获得的Lys M-cre/m TORfl/fl BMDMs与m TORfl/fl BMDMs相比,在应答LPS刺激方面出现了显著的表型差异,表达了更多的细胞因子IL-6和IL-12。在小鼠来源受限和需要提升巨噬细胞中特定基因敲除效率的情况下,本方案具有极为突出的优势,用少量的小鼠获得可靠的实验数据,也符合动物实验的"3R"原则。     

人ehCGβ+肿瘤小鼠模型的建立

采用脂质体转染方法将含人 eh CGβ编码基因的重组质粒 pc DNA3 -eh CGβ转染鼠SP2 / 0细胞 ,经 G41 8选择培养和有限稀释培养获得抗性细胞克隆 ,FSCA检测显示 :该抗性细胞的 eh CGβ表达比例高达 84.75%、平均荧光强度达 2 2 .1 2 ;采用相同方法获得转 HBV-pre S2 / S编码基因的 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞作为转染无关基因的对照细胞克隆 ,FACS检测发现该细胞表达 pre S2 / S比例为 72 .60 %、平均荧光强度为1 6.80。将不同数量的 Sp2 / 0 -eh CGβ细胞皮下接种 BAL B/ c小鼠 ,结果表明 ,接种 1× 1 0 5及以上Sp2 / 0 -eh CGβ细胞在小鼠体内能形成实体瘤 ,且实体瘤的大小与接种细胞数量呈正相关 (R值为 0 .989)。将相同数量 (5× 1 0 5个细胞 )的 Sp2 /0、Sp2 / 0 -eh CGβ和 Sp2 / 0 -pre S2 / S细胞接种同一只 BAL B/ c小鼠不同部位 ,结果发现 3种肿瘤细胞均在 BAL B/ c小鼠皮下形成了实体瘤 ,比较三组的平均瘤重量无统计学差异 (P >0 .0 5) ,提示外源性 eh CGβ基因的转染不影响Sp2 / 0细胞的致瘤特性。文章建立的人 eh CGβ 肿瘤细胞的荷瘤小鼠模型 ,为研究 eh CGβ 肿瘤细胞的生物学特征、eh CGβ 肿瘤细胞的生物治疗等提供实验基础     

自身抗原表位基因免疫诱导SLE样综合征小鼠模型的建立

通过自身抗原 Sm B/ B′主要表位进行基因免疫 ,诱导系统性红斑狼疮 ( SL E)样综合征的动物模型 ,为进一步探讨 SL E的发病机理奠定基础。以 RT-PCR的方法获得 Sm B/ B′主要表位编码基因 ,构建表达载体 pc DNA3 -Sm B/ B′,基因免疫后以免疫印迹法检测抗 Sm抗体、EL ISA检测抗 ds DNA抗体、免疫荧光法检测肾脏损伤。结果显示基因免疫后小鼠均产生抗 Sm抗体、抗 ds DNA抗体 ,且能诱发动物肾小球 Ig G类免疫复合物的沉积 ,表明自身抗原表位的基因免疫能成功诱导 SL E样综合征小鼠模型。