倍他米松ELISA检测方法的建立

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。     

基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠

【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp1^+/+)小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp1^+/-)小鼠,对Mrjp1^+/-小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp1^+/-小鼠之间交配产生WT、Mrjp1^+/-     

胶体金免疫层析试纸条法快速检测动物性食品中的氨苯砜

本研究以硝酸纤维素膜为固相载体,包被氨苯砜-OVA偶联物为检测带(T带),酶标羊抗兔二抗为质控带(C带)。依据免疫竞争法原理,建立了胶体金渗滤式试纸条快速检测动物性食品中氨苯砜的方法,最低检出限为20μg/L。样品前处理方法简单,在10min内即可目测判断结果。经高效液相色谱法验证,该方法可用。该方法操作简便、快速,适用于大批量临场动物性食品中氨苯砜残留的快速定性检测。