结核分枝杆菌三种分泌蛋白在原核表达载体中的克隆、表达与鉴定

对结核分枝杆菌的三种分泌蛋白Ag85B,ESAT-6和MPT－64基因进行克隆、鉴定与表达，为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。以结核杆菌H37RV株基因组DNA为模板，用PCR法对基因Ag85B、ESAT－6、MPT－64进行扩增，产物与载体质粒pET22b和pGEX-4T-1构建表达Ag85B、ESAT－6、MPT－64的重组质粒，将此重组质粒先转化到大肠杆菌DH5a内抽提质粒，酶切检验，再转化入表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）PLysS菌株内，对转化菌株以IPTG进行诱导后，破菌，离心，上清进行SDS－PAGE电泳，电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白，所表达的蛋白质相对分子质量为30000、6000、50000。结果表明：目的基因克隆到菌株内，重组结核杆菌分泌蛋白Ag85B、ESAT－6、MPT－64的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及上述三种抗原、抗体的大规模制备打下基础。