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为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示:通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。 相似文献
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用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku~100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku,60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western-blot(康复血清作为一抗,自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。 相似文献
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为了在农业种植中保证种植质量和经济效益,就需要保证种植的特性和质量,但在当前我国种子检验工作中,还存在一些问题,影响着种子的质量。基于此,针对我国种子检验工作现状、存在的问题进行分析,给出一定的解决对策。 相似文献
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将安徽某鸭场的400份鸭粪样品离心,微孔滤器过滤后提取上清液,将上清液与均匀涂布于LB固体培养基上的大肠杆菌O157ATCC43889滴定,6 h后初步鉴定噬菌体。将疑似存在噬菌体的上清液采用双层琼脂平板法进一步鉴定,结果分离鉴定了1株噬菌体,命名为EC43889-30。3次纯化后得到直径约为2 mm的噬菌斑,富集得到纯培养物。电镜观察,噬菌体粒子无尾,为直径50 nm左右的正六边形,形态与复层病毒科(Tectiviridae)的成员相似。将纯培养物稀释至107 pfu/mL,每隔10 min(至50 min)分别测其在50℃,60℃和70℃时噬菌体存活数,热稳定曲线显示,50℃时存活率均在70%左右,60℃时存活率明显下降,70℃时完全失活。宿主谱检测结果显示,其宿主范围较窄,对测试的42株鸭源大肠杆菌无裂解作用。 相似文献
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<正>一、中国古代刑罚嬗变的趋势中国古代刑罚发展的特点,就是刑罚的逐渐文明化、开放化、人道化和轻刑化的过程。(一)刑罚体系的中心由死刑、肉刑转向自由刑刑罚改革,首先意味着是刑法结构的改革。[1]刑罚嬗变史上看,在奴隶制社会和封建社会时期,由于环境恶 相似文献
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猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,猪链球菌带菌率由8.75%降到0,而抗体阳性率11.25%上升到100%。同时,部分未免疫猪群存在猪链球菌的隐性感染,猪链球菌病灭活疫苗免疫后,明显减少了猪群中猪链球菌的带菌率,整个猪群未发生猪链球菌病病例。免疫预防有效降低了猪群中猪链球菌带菌率和感染率,是防控猪链球菌病的重要措施之一。 相似文献
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太湖地区水稻产量、根圈土壤矿质态氮及氮素径流损失对氮肥的响应 总被引:2,自引:1,他引:2
通过氮肥梯度小区试验,研究了施氮对水稻根圈土壤及土壤溶液矿质态氮、叶片SPAD值、氮素累积量、水稻产量和氮素径流损失的影响.结果表明:基肥显著增加了苗期水稻根圈土壤矿质态氮,追肥对水稻根圈土壤及土壤溶液矿质态氮含量影响较小;施氮对水稻顶三叶SPAD值影响较为显著,而不同氮肥梯度下SPAD值无显著差异.分蘖期后,施氮量和植株氮素累积量存在显著正相关关系;收获期秸秆氮累积随着施氮量的增加而增加,但籽粒氮累积受施氮量影响较小.施氮量的增加对水稻增产效果并不显著,却显著提高了总氮径流损失,降低了氮肥农学效率,综合考虑产量、农学效率和总氮径流损失,该地区施氮量需低于理论最高产量施氮量(243 kg·hm-2);该季135 kg N·hm-2施氮量处理产量虽有所下降(差异不显著),但其农学效率最高且总氮径流损失最低.针对污染严重区域,在保证产量的基础上采用低氮肥投入而极大限度地降低施氮对环境的潜在污染是可行的. 相似文献
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