基于比色型适配体传感器高灵敏快速检测磷脂酰丝氨酸

近年来,利用生物加工法制备海洋食品活性物质成为研究热点,对加工过程中目标产物进行定量检测十分重要,而传统的检测方法面临很多限制,迫切需要新型简便的分析方法。实验以磷脂酰丝氨酸(PS)为待检物代表,构建了一种比色型适配体传感器,用于快速检测生物加工体系中的PS。带正电的壳寡糖与带负电的适配体先经静电吸附结合,PS存在条件下,适配体特异性地与PS结合导致壳寡糖释放,后者进而与带负电的纳米金结合,形成具有高催化活性的过氧化物纳米酶,催化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)产生与PS浓度成正相关的颜色信号,测定各样品的光吸收值,并与无PS的阴性样品相比计算光吸收变化率,从而实现快速定量。期间对适配体浓度、壳寡糖浓度、纳米酶催化参数进行了详细优化。在最优条件下,传感器具有良好的线性检测范围(0.50～50.00 nmol/L)和较高的灵敏度,检测限(LOD)低至93.84 pmol/L,且具有较好的选择性、准确性和重复性,用于分析实际生物加工样品中的PS时,回收率为95.63%～110.76%,相对标准偏差(RSD)均小于9%,整个分析过程仅需40 min。本研究成功构建了一种能高灵敏快速...     

岩藻黄质关键前体新黄质的代谢工程合成

岩藻黄质是海洋藻类中常见的叶黄素之一,尤其在褐藻中含量较高,具有抑菌、抗炎、抗肥胖、抗糖尿病、抗肿瘤、调节肠道菌群和抗器官纤维化等多种生理活性。新黄质是岩藻黄质的可能前体物质,首次在大肠杆菌(Escherichia coli)中构建新黄质合成途径,首先构建了pTrc99a-crt EBIYZ质粒,该质粒携带5个来自于菠萝泛菌(Pantoea ananatis)的基因crt E、crt B、crt I、crt Y和crt Z,编码的蛋白分别是牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶、番茄红素环化酶和β-胡萝卜素羟化酶。将该质粒转入大肠杆菌中,得到了产玉米黄质的工程菌E.coli BL21 pTrc99a-crt EBIYZ,玉米黄质产量(细胞干质量,下同)为0.70 mg·g^-1。以产玉米黄质工程菌为宿主,将来自三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的ZEP3基因去信号肽之后转入,得到产紫黄质的工程菌E.coli BL21 pTrc99a-crt EBIYZ p ACYCDuet-1-QZEP3。在紫黄质工程菌E...     

维生素A-DHA酯的酶法合成及纯化制备

维生素A具有维持正常视力、改善皮肤、抗衰老等多种生理活性,但极不稳定,很容易在光、热、氧的作用下发生分解。选择二十二碳六烯酸乙酯(Ethyl docosahexaenoate, EDHE)与维生素A醋酸酯(Vitamin A acetate, VAAE)作为底物,在脂肪酶Novozyme435的催化下发生转酯反应,从而合成一种新型的维生素A-DHA酯(Vitamin A docosahexaenoate,VADHE)。利用液相及质谱对目的产物进行鉴定,在此基础上,利用硅胶柱层析(C18填料)对反应体系中的VADHE进行纯化。经液相色谱检测,VADHE的纯度达到90%以上。为了进一步提高目的化合物得率,分别在有机溶剂体系和无溶剂体系中对转酯反应进行了优化。在有机溶剂体系中,反应6 h转化率可达40.61%。在无溶剂体系中,用100 mg脂肪酶催化反应4 h,转化率可达56.39%。该研究首次设计并合成了新型脂质VADHE,实现了该物质的纯化制备,为后期的活性检测实验奠定了基础。     

普鲁兰酶的研究进展

普鲁兰酶,是能够专一性切开支链淀粉中分支点处α-1,6-糖苷键的一种脱支酶,它在以淀粉为原料的食品工业中有着重要的应用。通过对该领域研究成果的整理,对产普鲁兰酶的微生物选育、酶的分离纯化、酶学性质特点、酶的应用等方面进行了综述。     

不同水解工艺对鱼溶浆蛋白水解效果的影响

本研究采用单酶水解、复合酶水解、酸水解及酶酸耦合水解4种水解工艺对鱼溶浆进行水解,以水解度为标准确定最佳水解工艺.结果表明:单酶水解工艺中,在最优条件下(酶解温度50℃,初始pH 5,加酶量2000 U/g,固液比1:15)以中性蛋白酶酶解鱼溶浆,其水解度最高值为40.37％;复合酶水解工艺中,中性蛋白酶和碱性蛋白酶复...     

菌丝霉素的发酵制备及其在饲料替抗中的潜在应用探究

研究旨在发酵制备菌丝霉素制剂,并探究其在饲料替抗中的潜在应用。试验对产抗菌肽菌丝霉素的重组毕赤酵母4Ple-61菌株发酵时间、甲醇诱导浓度和发酵体系pH值进行优化,分别利用真空冷冻干燥法和喷雾干燥法制备了含酵母细胞的菌丝霉素制剂。结果显示：甲醇诱导最佳浓度为1%,发酵pH值为5.5,诱导发酵120 h,此条件下4Ple-61菌株菌丝霉素具有较好的表达效果。与真空冷冻干燥法相比,喷雾干燥法的制备效果更好。将菌丝霉素制剂和鱼粉按照1∶1的质量比复配后,对金黄色葡萄球菌表现出明显的抑制效果。研究表明,菌丝霉素制剂在饲料替抗中具有一定应用潜力和良好开发前景。     

高效液相色谱法测定多杀菌素的方法研究

[目的]建立一种高效液相色谱法定量测定多杀菌素的分析方法。[方法]以甲醇、乙腈和水(含0.05%乙酸铵)为流动相,采用高效液相色谱仪对多杀菌素进行了测定。[结果]测得甲醇-乙腈-水的最佳配比为49.0∶49.0∶2.0,多杀菌素的最大检测波长为246 nm。方法的线性关系良好,线性相关系数为0.999 97;标准偏差为0.147 6,变异系数为0.143 8%,平均回收率为115.73%。[结论]该方法具有快速、简便、准确的特点,且重复性良好,适合多杀菌素的快速定量检测。