16S-23S rRNA基因间隔序列PCR及RFLP对奇异变形杆菌分离株的鉴别与系统发育分析

根据临床常见致病菌16S-23S rRNA基因间隔序列(ISR)两端的16S及23S rRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物,对9株奇异变形杆菌和6株相近菌株应用通用引物PCR扩增16S-23S rRNA ISR序列.通过PCR长度多态性比较、RFLP分析以及部分序列测序比较,分析鉴别奇异变形杆菌.结果显示,PCR长度多态性可以将奇异变形杆菌同其余菌种进行区分;RFLP分析可以将所有试验菌种进行区分;部分序列测序可以对奇异变形杆菌进行分型.由此表明,16S 23S rRNA ISR序列PCR及RFLP分析可以简单、快速、准确的鉴定奇异变形杆菌.     

禽波氏杆菌与REV共感染对SPF鸡免疫系统的影响

本研究用禽波氏杆菌(Bordetella avium,B.avium)和禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)人工感染SPF鸡胚和SPF雏鸡后,测定鸡胚死亡率和孵化率,检测SPF雏鸡的免疫器官指数、淋巴细胞比率和淋巴细胞转化率(LTR),探究REV和B.avium共感染对SPF鸡免疫系统的影响.结果显示,二者同时感染时鸡胚的孵化率只有27.85％,且SPF雏鸡的免疫器官指数和淋巴细胞转化率(LTR)显著低于正常对照组.因此,B.avium和REV共感染可造成SPF鸡胚孵化率大幅降低、1日龄SPF雏鸡免疫系统严重损伤及免疫功能低下.     

梧桐花黄酮的提取及其抑菌、抗病毒效果

以10倍原料质量的60％乙醇在75℃条件下对梧桐花进行浸提,并对总黄酮的含量进行了测定.为了研究梧桐花总黄酮对多种常见畜禽病原的体外抑菌、抗病毒作用,采用培养基打孔法,观察梧桐花总黄酮对致病菌的抑菌作用;采用试管法,检测梧桐花总黄酮的最小抑菌浓度;采用细胞培养技术,检测梧桐花总黄酮对新城疫病毒(NDV)和法氏囊病病毒(IBDV)在细胞内增殖的抗病毒作用.结果显示,梧桐花总黄酮对供试菌均具有抑菌作用,其中对四联球菌、八叠球菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌效果最好,抑菌直径D＞16 mm;梧桐花总黄酮在3.125 g/L时能够100％抑制NDV在CEF内增殖;梧桐花总黄酮在1.563 g/L时能够100％抑制IBDV在CFE内增殖;梧桐花总黄酮在体外质量浓度为1.563 g/L时可直接灭活所有NDV;梧桐花总黄酮在体外质量浓度为0.781 g/L时可直接灭活所有IBDV.结果表明,梧桐花总黄酮具有体外抑菌和抗病毒作用,为将其研制成新型、绿色环保的中草药制剂提供了试验基础.     

槐花多糖对支气管败血波氏杆菌的免疫增强作用

在兔支气管败血波氏杆菌灭活疫苗中加入不同剂量的槐花多糖,制备兔波氏杆菌槐花多糖灭活苗.选取体质量1 kg左右的健康獭兔72只,随机分为6组,其中Ⅰ～Ⅲ组为槐花多糖疫苗组(槐花多糖含量分别为60,40,20 g/L),Ⅳ组为兔波氏杆菌蜂胶疫苗对照组,V组为无多糖的兔波氏杆菌疫苗对照组,Ⅵ为空白对照组,各组分别于免疫后0,3,7,14,21,28,35,42 d采血,用平板凝集试验检测血清抗体效价,全自动血细胞分析仪测定淋巴细胞比率,试剂盒检测血清中IL-2的含量.结果显示,Ⅰ～Ⅳ组各指标均高于V组,其中Ⅰ、Ⅳ组显著高于V组(P＜0.05);Ⅱ组与Ⅲ组总体差异不显著(P＞0.05);Ⅳ组总体水平略低于Ⅰ组.由此表明,槐花多糖能提高獭兔对支气管败血波氏杆菌的免疫作用,60 g/L剂量的效果最佳,这为开发槐花多糖作为新型免疫佐剂和免疫增强剂奠定了基础.     

山东部分地区毛皮动物肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及系统发育分析

为确诊近两年造成毛皮动物(狐狸、貉子、水貂)死亡的主要细菌性病原,本研究在流行病学调查基础上,对新鲜病死毛皮动物进行临床症状观察、病理学检查,同时取病变肝、肺、气管为样品分离纯化细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16S rRNA基因的分子鉴定.结果显示,从剖检病死毛皮动物的肺、肝、气管组织等均检出同种细菌,分离菌株对菌必治和舒巴坦高度敏感,对小白鼠具有较强致病作用,与已知的肺炎克雷伯氏菌16S rRNA序列的同源性为98.6％～100％.综合分析,该分离菌株为克雷伯氏菌属的肺炎克雷伯氏菌.     

泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗免疫增强的协同作用

采用改进的水提醇沉法提取泰山松花粉粗多糖,并制备禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗。取1日龄SPF雏鸡300只,随机分为6组,I～V组分别免疫含有松花粉多糖100g／I。的禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗,Ⅵ组只免疫禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗,I、Ⅱ组在前2周分别口服高、低剂量的乳酸杆菌活菌菌液1mL,HI、IV分别口服高、低剂量的乳酸杆菌热灭活菌菌液1mL。在首免后,每周采取血液和小肠,用间接ELISA法检测血清抗体水平、MTT法检测外周血淋巴细胞转化率、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率、ELISA法检测小肠sIgA含量和IL-2水平。结果表明,I～Ⅳ组抗体水平、IL一2含量、淋巴细胞比率、淋巴细胞转化率、sIgA含量显著高于V组、Ⅵ组（P％0．05）;V组各检测指标显著高于Ⅵ组（P〈O．05）;乳酸杆菌活菌组各检测指标比灭活菌组略高,高剂量组略高于低剂量组。因此,泰山松花粉多糖作为免疫佐剂能显著提高疫苗的免疫效果,同时1：3服乳酸杆菌能进一步增强动物对疫苗的免疫应答能力,口服乳酸杆菌活菌与口服热灭活菌效果差异不显著,泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对增强禽波氏杆菌OMP疫苗的免疫力有协同作用。