发酵方式对放线菌WS-22011次生代谢产物的影响

以放线菌WS-22011为研究对象,通过研究摇瓶发酵和发酵罐发酵两种不同发酵方式下WS-22011产生的次生代谢产物多样性及产量随时间变化的动态趋势,确定WS-22011最佳发酵方式及兼顾代谢产物多样性、产量的最佳发酵时间。结果表明,对于WS-22011菌株来说,在发酵罐发酵和摇瓶发酵两种发酵方式下产生的次生代谢产物及多样性基本一致,两种发酵方式均可以保证次生代谢产物的多样性和产量,但次生代谢产物最大总产量出现的时间有所差异,从节约时间及成本考虑,可首选发酵罐发酵;而如果需得到所有的次生代谢产物,则首选摇瓶发酵,且发酵时间需适当延长。通过制备分离得到了4个具有较高活性的化合物,LC-MS分析结果表明为碰撞霉素。     

透明颤菌血红蛋白基因在多粘芽孢杆菌中的克隆和表达

本研究将启动子P43与透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin)基因(vgb)通过重叠PCR进行融合,克隆到芽孢杆菌表达载体p CM20上,将筛选得到的重组载体p CM20-vgb转化多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)NR1,Western-Blot表明重组菌株表达了VHb蛋白,该蛋白的表达对重组菌体的生长和多粘菌素的产生均有促进作用。     

枯草芽孢杆菌NBF809防治番茄棒孢叶斑病研究

采用平板对峙结合显微观察确定枯草芽孢杆菌NBF809菌株对多主棒孢的抑菌活性,采用活体盆栽试验研究其对番茄棒孢叶斑病的防治效果。结果表明,在平板对峙条件下NBF809菌株对多主棒孢具有良好的抑菌活性,显微镜下观察到菌丝发生扭曲、肿胀和变形;盆栽试验结果表明NBF809菌株对番茄棒孢叶斑病的防治效果达到73.26%。聚合酶链式反应用于检测NBF809菌株的抗菌素生物合成基因,扩增到bac D、itu C、itu D、mrs M和myc C 5个基因,涉及Bacilysin、Iturin、Mersacidin和Mycosubtilin 4种抗菌素的合成。     

多粘芽孢杆菌中2,3-丁二醇脱氢酶的克隆和表达

将来自于多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)中的2,3-丁二醇脱氢酶基因pla C在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中进行了诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明,该基因的表达产物主要是生成内消旋型2,3-丁二醇,其氧化2,3-丁二醇的最适温度是50℃,最适pH为10,而还原乙偶姻的最适温度为60℃,最适pH为6。     

细菌纤维素高产菌株的诱变育种

以木醋杆菌1.1812为出发菌株,采用不同剂量的紫外线和亚硝酸进行了诱变,从紫外线诱变后的突变菌株中,获得了几株细菌纤维素高产菌株,其中UV-45菌株最高产量较出发菌株提高了38.8%。     

从土壤中高效分离苏云金杆菌的方法

在醋酸钠分离方法的基础上添加抗生素,能显著提高从土壤中分离苏云金杆菌的效率。当青霉素钠盐和硫酸庆大霉素的浓度分别达到４００μｇ／ｍｌ时,除地衣芽孢杆菌,短小芽孢杆菌和日本甲虫芽孢杆菌有产生长外,其它９种杂菌均不能生长。对２９个Ｂｔ亚种的生长抑制试验结果表明,仅４业种有轻度至中度的生长抑制,但仍能形成孢晶。其它各亚种均能正常生长和形成孢晶。醋酸钠－抗生素方法的可操作浓度为每克土壤稀土２０倍,较醋酸钠     

放线菌HBERC-39158抗真菌活性化合物的分离鉴定

以从四川省乐山市采集土样中分离的1株放线菌HBERC-39158为研究对象,对该菌株进行了16S分子鉴定、摇瓶发酵及室内生物活性测定,并对发酵提取物进行HPLC制备,获得了不同时间流出的样品36份,经组分活性测定,确定了其活性部位,并制备了活性化合物纯品,对其进行了HPLC-MS及NMR分析。结果表明,该菌株为链霉菌(Streptomyces kronopolitis),提取物对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麦颖枯病菌(Septoria nodorum)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)等重要农作物病原真菌具有良好活性,其活性组分出现在14～19 min。根据活性化合物紫外吸收光谱、质谱数据以及核磁共振谱的解析,结合文献比对,确定其活性化合物为factumycin。     

BtMP—342菌株的生物学特性分析及毒力测定

１９９２年，从自然死亡尺蠖幼虫体内分离出ＢｔＭＰ－３４２菌株，经对落叶松毛虫室内外生测证明，该菌株是高毒力的优良菌株。１９９５年７月－８月期间，采用ＰＣＲ技术分析了ＢｔＭＰ－３４２菌株特异性，该菌株含有ＣｒｙＩＡａ、ＣｒｙＩＡｃ、ＣｒｙⅡＡ、ＣｒｙⅡＢ以及ＣｒｙＶ等五种毒蛋白基因。质粒电泳图谱分析表明，ＢｔＭＰ－３４２菌株由９个质粒构成，其中ＣｒｙⅠＡａ和ⅠＡｃ基因位于１５１．３Ｍｄ和１４６．８Ｍ     

不同乙酰度壳聚糖的制备及抗菌活性的测定

通过高脱乙酰度壳聚糖的均相N-酰化反应,控制摩尔比制备一系列具有不同乙酰度而分子量相近的乙酰化壳聚糖,应用凝胶渗透色谱和光散射联用、电位滴定和傅立叶红外光谱手段表征产物的结构,并测试不同乙酰度壳聚糖的抗植物病原真茵活性,且制备一系列较高乙酰度而重均分子量(Mw)不同的水溶性壳聚糖,考察分子量对其抗茵性的影响.结果表明,1.0 g·L-1的酰化壳聚糖对葡萄灰霉病病菌、小麦颖枯病病茵、黄色镰刀茵和立枯丝核菌 4种植物病原真菌具有明显抗茵性,抗菌性随着乙酰基团的增加而增强,酰化壳聚糖和壳聚糖对葡萄灰霉病病菌和小麦颖枯病病菌的最低抑茵浓度(MIC)分别为0.5 g·L-1和1.0 g·L-1.较高乙酰度的水溶性壳聚糖具有抗茵性,随着重均分子量的下降,对黄色镰刀茵的抗茵性增强,而对其他3种菌的抗性下降.     

真菌菌株sf1760农用活性物质的分离、纯化及LC/MS分析

采用液体发酵,冷冻干燥,萃取,HPLC半制备,生物测定,HPLC纯化,活性物质的LC/MS/MS分析研究真菌菌株sf1760发酵活性物质的主要成分.结果从真菌菌株sf1760中提取得到两个组分具有抑制作物病原真菌的作用.经LC/MS/MS分析组分l的紫外吸收峰为264nm,其母离子ESI+316.6,ESI-314.8;其子离子ESI+263.6,ESI-261.7,与Gliotoxin的紫外和质谱信息相同.组分2的紫外吸收峰为210nm,其质谱ESI+444.8,子离子为ESI+228.6,ESI+199.6;ESI-442.9,子离子为ESI-240.6,与Fumiquina-zoline C的紫外和质谱信息相同.