不同注射剂量9型腺相关病毒载体在小鼠脑和脊髓表达效果分析

腺相关病毒(AAV),尤其是从轴突末端转移到神经元的AAV9型,是研究神经环路和解析大脑功能的有力工具。利用囊泡型谷氨酸神经元(VGlut2)基因敲入小鼠联合脑立体定向注射,通过将AAV9-DIO-ChR2-EGFP病毒注射于VGlut2转基因小鼠的蓝斑核(LC),探究不同注射剂量对病毒侵染范围和小鼠体重的影响。结果表明,与高注射量(1μL)相比,低注射量(0.5μL)可将AAV9-DIO-ChR2-EGFP限定至蓝斑核(LC)。在AAV9-DIO-ChR2-EGFP注射3周后,侵染范围由LC延伸至初级运动皮质(primary motor cortex, M1)、下丘脑、中缝苍白核(araphe pallidus nucleus, Rpa)和颈髓(cervical spinal cord, CSC)。随后检测了低注射量的AAV9(0.5μL)是否影响小鼠体重,统计结果表明,0.5μL AAV9注射对小鼠体重无影响(P=0.979 5)。结果表明,低注射量(0.5μL)可以在一定程度上限制AAV的表达范围,并且脑内注射AAV9不会改变小鼠体重。     

从下丘脑室旁核向背肩胛棕色组织发送投射的谷氨酸能神经元的鉴定

谷氨酸能神经元可抑制摄食并防止肥胖。有证据表明,在缺乏囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)的小鼠中,重新表达专一蛋白1(SIM1)神经元上的VGlut2可降低采食。然而,VGlut2神经元的位置和轴突投射尚不清楚。因此,本试验探寻了向背肩胛棕色脂肪组织(IBAT)发送神经元投射的上游脑区,检测了VGlut2和黑皮质素4型受体(MC4R)神经元的脑内定位,确认了胰淀素(amylin)对于VGlut2和MC4R免疫阳性神经元表达的调控作用,拓展了VGlut2神经元发送神经支配的大脑区域。结果显示,PVN^VGlut2神经元向IBAT发送密集的神经支配信号。在前皮质杏仁核(ACo)、纹状体(CPu)和海马齿状回(DG)发现VGlut2与MC4R共定位。amylin注射显著促进PVN^VGlut2::MC4R(P=0.004 8)免疫阳性神经元表达,提示VGlut2与MC4R涉及amylin的调节过程。PVN^VGlut2神经元向下丘脑腹内侧核(VMH)、外侧下丘脑(LH)、中脑导水管周围灰质(PAG)和蓝斑(LC)核团发送神经元投...