百合愈伤组织的诱导及瞬时表达的研究

以百合品种‘罗宾娜’(Robina)鳞片、花丝和花梗分化的不定芽为试材,诱导愈伤组织,并通过固体、液体和经过液体预培养后在固体上培养的方式继代增殖.结果表明:分化的不定芽在萘乙酸(NAA)0.5 mg/L的培养基上愈伤组织的诱导率最高；从芽基部形成的愈伤组织以经过液体预培养后在固体上培养的方式继代,繁殖速率最大,再生率为100％.使用农杆菌介导转化pCAMBIAl301质粒后,3种不同方式培养的愈伤组织的GUS瞬时表达效率差异并不显著.     

蜡梅品种资源及其开发利用

蜡梅是我国特有传统名花,拥有悠久的栽培历史。本文在对蜡梅品种资源进行概述的基础上,从观赏、药用、食用和工业香料提取等方面论述了蜡梅品种的开发利用价值,并提出蜡梅产业化发展对策。     

基于SPOC的“园林树木学”课程线上线下混合式教学的探索

“园林树木学”是高等农林院校风景园林和园林等专业的必修课程,具有知识点繁杂、实践性强和多学科交叉等特点。为了提高课程教学质量,西北农林科技大学“园林树木学”课程组遵循“以学生为中心”的教学理念,针对课程的理论与实践紧密结合、多学科交叉等特点,开展了基于SPOC的线上线下混合式教学的实践探索。一是建设在线教学资源平台,丰富线上教学资源并按照课程章节梳理归类为必学板块和自主学习板块,同时推送碎片化学习资源。二是重构课程教学内容,明晰教学的重点和难点,根据教学内容的特点选择恰当的教学形式和翻转课堂模式,将教学的重心从“教”转变到“学”上。三是将线上线下混合式教学的实施分为课前、课中、课后3个步骤,明确任课教师与学生在各个步骤需要完成的任务。教学实践结果显示：基于SPOC的“园林树木学”混合式教学强化了线上线下教学环节的有机衔接,实现了信息技术与教育教学的深度融合,达到了预期的课程教学效果,不仅提升了学生的实践能力和创新能力以及学习成绩,而促进了课程的自身建设和教学质量。     

温度与赤霉素对异味铁筷子种子萌发的影响

铁筷子种子在自然条件下萌发时间较长且发芽率较低。为了提高铁筷子属植物种子的发芽率,以异味铁筷子种子为实验对象,通过体视显微镜观察种子形态特征,同时测定种子含水量、吸水率等相关指标;设置不同的温度和赤霉素浓度梯度,研究赤霉素与温度层积处理对异味铁筷子种子萌发的影响。结果表明,异味铁筷子种子的平均长度为(4.435±0.254)mm,宽度为(2.407±0.214)mm,千粒重为(13.990±0.070)g;温度处理在10周25℃层积后继续4℃处理2周,种子的萌发率最高,为60%;质量浓度为400 mg/L的赤霉素处理能显著提高异味铁筷子种子的发芽率和发芽势,发芽率为73.3%。     

通过重叠PCR构建2个增强型植物花特异双向启动子

基于植物基因工程要求精确调控的目标,为转基因提供更多可供选择的启动子,使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35Senhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhancer-pLCHS。实验中,用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV 35S增强子序列(35Senhancer)、OCS增强子序列(OCS enhancer)为模板,根据重叠延伸PCR原理,设计并合成了10条引物,进行两轮PCR,产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列。使用DAN回收试剂盒回收两段序列,克隆到pGEM-T Easy载体中并导入大肠埃希菌TOP10进行扩繁和保存,扩繁菌液进行测序分析,测序证实得到的两段序列与设计的双向启动子序列完全一致,成功获得2个增强型植物花特异双向启动子。本研究的结果能为今后利用多基因共转化的方法精确调控矮牵牛、百合等重要花卉的观赏性状提供有用的启动子。     

西安市草本花卉应用现状调查与分析

针对西安市草本花卉的种类、花色、花期及应用等方面,对西安市的公园、景点、城市主干道等地方进行了实地调查,整理出西安市常用草本花卉名录.在了解草本花卉的应用形式、应用现状及存在问题的基础上,对西安市园林应用中常用草本花卉的种类组成、使用频度、花色搭配及丰富度等进行分析,并对西安市草本花卉的选择及应用提出建议.     

农杆菌介导的ACO-RNAi载体对百合胚性愈伤的转化

【目的】建立高效稳定的百合遗传转化体系,以得到甁插寿命长、开花早的百合转基因品种。【方法】以OT百合“罗宾那”的胚性愈伤组织为供试材料,从共培养方式（固体或液体共培养）、农杆菌菌液浓度（OD₆₀₀=0.4,0.6,0.8,1.0,1.2）、亚精胺浓度（0.5,1.0,1.5,2.0 μmol/L）以及超声波处理（功率60 W,处理时间分别为0,1,2,3,4 min）等方面对百合遗传转化体系进行优化。【结果】液体共培养能提高稳定表达率并减少褐化率,稳定表达率为 13.00%,褐化率为55.00%;农杆菌菌液浓度（OD₆₀₀）在0.8时为最适侵染浓度,此时稳定表达率为12.77%,褐化率为55.00%;侵染前向菌液中加入2.0 μmol/L亚精胺能提高转化效率,稳定表达率为88.30%;当超声波功率为60 W、处理时间为3 min时,百合胚性愈伤的瞬时表达率和稳定表达率均最高,分别为88.90%和27.33%;潮霉素抗性植株经GUS组织化学染色、目标基因PCR检测及Southern blot分析,证明目的基因已整合到百合基因组中。【结论】 转化条件的优化能够有效提高农杆菌介导的百合胚性愈伤组织的遗传转化率。     

葡萄风信子花青素3-O-葡糖基转移酶基因的克隆及其表达分析

花青素3-O-葡糖基转移酶(3GT)是花青素苷合成最后一步的关键酶,可把不稳定的花青素催化成花青素苷。本研究利用PCR技术从蓝色葡萄风信子‘亚美尼亚’(Muscari armeniacum)中克隆到一个3GT基因(Ma3GT),Ma3GT cDNA全长1 377bp,编码458个氨基酸,与其他植物的3GT蛋白序列相似性达55%~64%。进化分析表明,Ma3GT与单子叶植物3GT聚为一类,与小苍兰(Freesia hybrida)、荷兰鸢尾(Iris hollandica)3GT亲缘关系最近。荧光定量PCR分析发现,Ma3GT在‘亚美尼亚’花(S_4)中高表达,在叶片中微量表达,根和鳞茎中几乎不表达,在‘白丽人’及‘粉日出’各个组织中均不表达。在‘亚美尼亚’中,Ma3GT的转录表达受花发育调控,开花早期(S_1)几乎不表达,随着花发育表达量逐渐增加,至完全开放的时期(S_4)达到最高峰。此外,Ma3GT在不同品种的花中转录表达不同,在蓝色品种‘亚美尼亚’中高表达,而在白色品种‘白丽人’和粉色品种‘粉日出’中几乎不表达。本研究为进一步研究Ma3GT基因在葡萄风信子花瓣呈色中的功能及其花色分子育种提供基因资源和依据。     

农杆菌介导的葡萄风信子愈伤组织遗传转化体系的优化

葡萄风信子(Muscari spp.)为百合科葡萄风信子属植物的总称，该属植物多具有稀少的正蓝色花色，是研究单子叶植物花青苷合成机理的模式材料。为开发一种高效的葡萄风信子遗传转化体系，本试验以葡萄风信子常见种亚美尼亚(M.armeniacum)、栽培品种‘黑眼睛’(M.aucheri‘Dark Eyes’)为材料，用叶片和花蕾分别诱导获得愈伤组织，对愈伤组织的潮霉素敏感性进行测试，对根癌农杆菌介导的愈伤组织遗传转化体系进行优化。试验结果表明：葡萄风信子亚美尼亚和‘黑眼睛’愈伤组织的潮霉素临界浓度分别为150 mg·L^-1和120 mg·L^-1。GUS染色结果显示不同基因型、不同农杆菌菌株及不同功率超声处理的愈伤组织瞬时转化效率差异不显著。而液体培养的花源愈伤组织能获得更高的瞬时转化效率，为葡萄风信子遗传转化的最优受体。其最高瞬时转化效率为98.73%。试验共获得了209块抗性愈伤组织，经PCR和RT-PCR检测，阳性率可达90%。本研究为在葡萄风信子中快速有效的开展基因功能研究奠定了技术基础。