雌二醇对雌性家兔十二指肠肌电活动的作用研究

拟阐明雌激素调节十二指肠运动的作用规律,并筛选和建立其浓度与十二指肠肌电活动监测指标的数学模型。通过构建试验家兔的卵巢摘除动物模型和电极埋置动物模型,肌注不同剂量的苯甲酸雌二醇,采用BL-420F生物机能试验系统分别记录各试验组家兔十二指肠肌电活动变化,并对结果进行统计分析,结合对各监测指标的函数拟合精度分析选择并构建苯甲酸雌二醇与十二指肠肌电活动监测指标最优的数学模型。结果表明,十二指肠肌电的振幅、频率与肌电活动指数均随苯甲酸雌二醇剂量的增加呈现出一种先升高后降低的变化趋势。通过对各监测指标进行分析、筛选,构建了雌二醇剂量与肌电活动指数关系的函数模型,对该函数进行分析后可知,肌电活动指数的变化范围为1.50~5.23mV·min~(-1),并在雌二醇剂量为0.098mg·kg~(-1)时肌电活动指数达到最大值5.23mV·min~(-1)。此外,以雌二醇剂量0.063、0.098、0.133mg·kg~(-1)为分界点,可将肌电活动指数随雌二醇剂量增加而变化的趋势分为指数型增加、对数型增加、指数型减小以及对数型减小四个区间段。上述结果表明雌二醇对十二指肠肌电活动呈现明显浓度依赖性双重调节作用,并且这种调节作用是在十二指肠本身具备一定水平的肌电活动的基础上进行的,即雌激素对十二指肠肌电活动的调节作用是间接的。此外十二指肠的肌电活动在不同浓度范围雌激素的作用下表现不同的变化趋势,呈现出明显的区间效应。本试验的研究结果为阐明雌激素在体内调节十二指肠运动的调节方式和雌激素类药物的研发和应用提供了一定理论依据和参考。     

雌激素受体与M2mAchR在成年雌兔背根神经节中的共存

为检测成年雌兔背根神经节中是否存在雌激素受体(ER)与M2型乙酰胆碱受体(M2mAchR)的分布与共存,采用免疫荧光双标记染色法对ER与M2mAchR在背根神经节中的分布情况进行了研究。结果显示,在成年雌兔背根神经节中:(1) ER分布主要以神经元为主。其中,ERα主要表达于中小型神经元,而ERβ则多分布于大中型神经元。(2)相较ER而言,M2mAchR分布更为广泛,除神经元外,神经纤维等组织上也有弱阳性表达。(3)两种ER与M2mAchR均有共存现象,但共存情况存在差异,ERα/M2mAchR主要共分布于中小型细胞,ERβ/M2mAchR主要共分布于大中型神经元。结果表明,首先,雌激素具有通过影响背根神经节部分神经元的活动而实现对躯体内脏感觉活动间接调节的条件。其次,在此影响的机制中,雌激素除可以直接作用于神经元上的受体之外,还具有与共表达的M2mAchR交互作用而实现的条件。为研究雌激素影响神经系统调控活动的机制以及背根神经节的神经内分泌调节机制提供了重要的形态学依据。     

17β-雌二醇对仔兔DRG神经元内Ca~(2+)浓度的影响

旨在研究雌激素能否影响初级感觉神经元调控活动以及Ca~(2+)在此影响机制中的作用。采用细胞免疫荧光技术观察仔兔背根神经节(DRG)神经元原代培养体系中雌激素受体(ER)的分布特点;采用激光共聚焦显微镜技术监测17β-E_2(1、10、100、1 000nmol·L~(-1))对体外培养72h仔兔DRG神经元细胞质内游离Ca~(2+)荧光强度的影响。结果表明,ERα、ERβ、GPR30在原代培养DRG神经元中分别有45.61%、32.39%、39.82%的阳性或强阳性神经元,且不同ER阳性或强阳性神经元中不同大小类型神经元所占比例不同;ERα、ERβ在DRG神经元细胞核为强阳性,细胞质为中等阳性,可见极少量弱阳性神经突起;GPR30在DRG神经元细胞核中为弱阳性或阴性,细胞质为中等阳性或强阳性,神经突起呈弱阳性。三种ER均在阳性反应神经元数量、大小类型、反应程度及分布部位上表现一定程度的"异质性";依据17β-E_2诱导神经元内Ca~(2+)荧光强度的变化特征,可将DRG培养体系中的神经元分为3种类型:兴奋型(19.28±0.70)%、抑制型(3.54±0.02)%和不敏感型(77.17±1.48)%;兴奋型神经元又可根据Ca~(2+)荧光变化强弱分为强兴奋型(0.195±0.118)和弱兴奋型(0.032±0.003)两种,随着17β-E_2浓度增大,强兴奋型神经元比例减少,但总兴奋型神经元比例各浓度组无显著性差异,体现出随17β-E_2浓度增大,对强兴奋型神经元[Ca~(2+)]_i增加幅度具有一定的抑制作用,但又非完全抑制。结果提示,(1)仔兔DRG神经元培养体系中神经元三种ER阳性反应的"异质性",表明雌激素可能对不同感觉神经元发挥影响效果不同;(2)Ca~(2+)通路是雌激素影响部分初级感觉神经元活动的作用机制之一。其次,雌激素可通过两种方式对DRG神经元胞内Ca~(2+)通路的效应发挥抑制性作用,一是可直接抑制少量神经元胞内Ca~(2+)信号通路效应;二是随浓度增大对强兴奋型神经元胞内[Ca~(2+)]_i增加所激活效应发挥一定的抑制作用。     

雌激素受体α、β在雌性山羊颈动脉体的分布

为探索雌性山羊颈动脉体(CB)是否具有接受雌激素作用的条件,本试验采用免疫组织化学SP法检测雌性山羊CB中ERα、ERβ的分布特点。结果表明,雌性山羊CB中ERα与ERβ的免疫阳性产物分布广泛,在球细胞、支持细胞、血管内皮细胞及周围结缔组织均有不同程度的阳性产物分布,但主要分布于球细胞。以上结果表明CB的球细胞是雌激素作用的主要靶点,提示雌激素可能通过作用于分布在CB球细胞上的ER对心血管系统的功能活动产生神经途径的调节作用。