poly(I:C)刺激鸡胚胎成纤维细胞产生外泌体的抗新城疫病毒活性

外泌体(exosomes,Ex)是由各种细胞分泌的微小囊泡,可以通过传递RNA、DNA及蛋白质改变受体细胞状态。poly(I:C)是一种dsRNA模拟物,具有一定的抗病毒活性。为研究经poly(I:C)处理后鸡胚胎成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)来源Ex的抗新城疫病毒(NDV)活性,通过超速离心法分离得到CEF来源Ex,并通过透射电镜和免疫印迹试验(Western blot)对其进行鉴定,随后评估其抗NDV活性及活化靶细胞抗病毒能力。结果发现,poly(I:C)刺激使CEF Ex分泌量增加1倍,且poly(I:C)Ex表现出比PBS Ex更强的抗NDV作用。进一步研究表明,poly(I:C)刺激CEF产生的Ex可通过TLR3-NFκB途径产生抗NDV作用。     

新城疫、禽流感和禽腺病毒病三联嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

采用新城疫病毒样颗粒载体平台和昆虫杆状病毒表达系统,将禽流感H9N2株HA、禽4型腺病毒Fiber2嵌合至新城疫病毒样颗粒载体表面进而构建“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)。PCR及免疫荧光检测结果显示,成功构建了重组杆状病毒rBV-cFiber2;透射电镜结果显示,ND-AI-FAdV4 cVLPs直径约为100 nm、含有囊膜的空心蛋白颗粒;免疫印迹结果显示,嵌合型病毒样颗粒各组分蛋白均正确表达。本试验为新城疫、禽流感和禽腺病毒病的安全、高效病毒样颗粒新型疫苗候选株的应用奠定了基础。     

梨矮化砧木中矮1号组培快繁技术研究

为建立一种增殖系数高、生根效果好的梨矮化砧木中矮1号的组培快繁技术,本试验以中矮1号组培苗为试材,分别对其快繁的外植体种类、消毒方式、继代培养基配方、生根培养基配方和生根培养条件进行研究筛选。结果表明,一年生枝条水培萌发的叶芽和无花芽混合芽更适合作为中矮1号的外植体,最佳消毒方式为：75%酒精30 s→0.1%升汞3 min→无菌水30 s。最佳继代培养基为：MS+30 g/L蔗糖+1.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L GA₃+7 g/L琼脂、pH=6.0,平均增殖系数为5.52;6-BA对继代增殖的影响最大,主要影响增殖系数、苗高、叶片数和节间数,NAA主要影响芽长和节间长度,GA₃对芽长、苗高和节间长度也有一定影响。两步生根法生根培养效果优：先在配方为1/2MS+15 g/L蔗糖+1.0 mg/L IBA+0.4 mg/L IAA+0.6 mg/L NAA+7 g/L琼脂、pH=6.0的培养基上培养7天(前5天为暗培养),后转入无激素培养基培养,平均生根率达72.22%;活性炭(AC)对生根培养的影响最大...     

自动化生产线搬运机械手控制系统的设计

本文介绍了机械手的总体结构、工作过程以及原始零件的选择.选择了西门子PLC作为控制器,并使用了西门子PIC基本和特殊传动模块来控制变频器,伺服和电磁阀系统.电路图是根据控制要求设计和执行的.调试和实验表明,自动化操作机械手在生产操作中取得了显著的控制效果,提高了企业生产效率,达到了企业生产要求.     

现代机械制造工艺与精密加工技术探析

科学技术促进社会发展.随着科学技术的不断发展,中国制造业也得到了不断发展和完善.现代机械制造的发展是工业和农业等基础产业的重要推动力.传统的机器制造工艺不再令人满意,由于实际生产工作需要机器,因此不断优化机器制造技术和改进精密加工技术是现代机械制造行业的重中之重.本文基于当前现代机械制造和精密加工技术的施工特点进行分析...     

杜梨嫩枝扦插影响因素探究

为探究杜梨嫩枝扦插的影响因素,筛选出最佳扦插方法,提高其扦插成活率,以杜梨嫩枝为试材,采用单因素试验设计筛选最优插条来源、新梢部段、插条长度和扦插基质,正交试验设计筛选最佳扦插生长调节剂配比。结果表明：连栋温室中采集的杜梨新梢中部段、长10～15 cm的插条更适合杜梨嫩枝扦插;IBA对扦插生根的影响大于NAA和IAA,IBA主要影响生根率和平均根数,NAA和IAA主要影响平均根长;基质湿度和基质配比是影响扦插成活的2个重要因素,其中基质湿度对嫩枝扦插的影响大于基质配比。综上,以长10～15 cm的温室杜梨新梢中部段为插条,在100 mg/L IBA+40 mg/L NAA+10 mg/L IAA中浸泡1 h,再插入河沙∶珍珠岩∶草炭土=1∶2∶2的半干湿基质中,扦插生根率可达70%。     

动物RNA病毒VLPs疫苗的研究进展

RNA病毒引发了众多的人类、动物重大疫病和公共卫生事件,然而目前尚无针对RNA病毒的特效药物,开发安全且有效的疫苗是控制RNA病毒感染的最有效手段,新型疫苗研发和使用已经是第3次疫苗革命的主题。病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是病毒的一种或几种结构蛋白构成的纳米级空心颗粒,不含有感染性遗传物质,无法自我复制,具有较高安全性。另外,VLPs形态结构与天然病毒粒子类似,保留了天然病毒粒子的空间构象,易被宿主免疫系统有效的识别、摄取和递呈,进而高效地诱导T细胞和B细胞的免疫反应,是近年来新型疫苗领域中的研究热点。现对RNA病毒结构与功能、VLPs疫苗的分类、包装与嵌入、表达系统及载体动能、免疫原性评价、蛋白定量及纯化等方面进行综述。     

传染性法氏囊病毒VP2蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建和鉴定

将传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)强毒株的保护性蛋白VP2替换新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白胞外域部分,利用杆状病毒表达系统,构建了含有IBDV候选抗原表位VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-VP2,并通过间接免疫荧光试验鉴定杆状病毒蛋白表达正确。rBV-VP2与NDV-HN、NDV-F、NDV-M组装成病毒样颗粒(cVLPs),形成含有IBDV候选抗原表位的IBD-ND二联病毒样颗粒(IBD-ND cVLPs),利用Western blot鉴定cVLPs各组分蛋白,证明IBD-ND cVLPs各组分组装正确。IBD-ND cVLPs的构建可为我国养禽业提供一种绿色、安全且可一针多防的IBD-ND二联病毒样颗粒疫苗候选株。     

梨叶片原生质体制备方法的建立及其基因瞬时转化试验

以‘新梨7号’梨叶片为材料,探究影响原生质体分离的主要因素,制备高产优质的叶肉原生质体,并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶,0.1%果胶酶,0.4%离析酶,0.5 mol·L^-1甘露醇,20 mmol·L^-1 KCl,20 mmol·L^-1 MES,10 mmol·L^-1 CaCl2,1.0 g·L^-1 BSA)中酶解12 h,可制备出产量为1.09×10⁶ protopl·mL^-1、活力为90%的原生质体。将1～2μg·mL^-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40%PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h,可以观察到GFP绿色荧光信号,转化率可达40%。     

鸡毒支原体TM-1蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建及鉴定

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染引起的禽类的慢性呼吸道病(chronicrespiratory disease,CRD)与新城疫(Newcastle disease,ND)是严重危害禽类的两种重要疾病,可呈并发或继发感染,给养禽业造成巨大的经济损失.因此,研制安全有效、免疫程序简...