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根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET一30a载体中,构建了原核表达载体pET—VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western—blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1:100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。 相似文献
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犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA 方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1:100,作用时间为60 min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2 000,作用时间为60 min;底物作用时间为10 min;判定标准为S/P≥O.282时为阳性,S/P≤0.226时为阴性.该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆茵痛等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15%,显示该方法具有良好的重复性;与商品化CPV ELISA试剂盒进行比较,符合率为96.5%.本研究为现地免疫犬群抗体监测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法. 相似文献
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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDVELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其作用时间为45min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 相似文献
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