马立克氏病病毒CV1988株pp24基因的克隆与表达

根据马立克氏病病毒（MDV）国际参考强毒CA株pp24基因序列，设计和合成了一对引物，其两端分别含SalI和EcoRI的酶切位点，以CV1988株基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增其pp24基因。PCR产物经纯化后，按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游，并用序列测定验证。将重组质粒转化的大肠杆菌BL21，在1.0mMIPTG和37℃条件下诱导，GST-pp24基因获得了表达。诱导菌体的裂解物经12%的SDS聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE）和Westemblot试验验证。得到大小为43kD的融合蛋白，与预期大小一致。将该融合蛋白的凝胶带切下研碎后免疫小鼠三次后，其血清与MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）在间接免疫荧光试验中呈阳性反应。     

REV分离株囊膜糖蛋白基因的克隆及序列分析

根据网状内皮组织增生症病毒（REV）SNV株env基因的序列，设计并合成了2对引物，利用该引物，以中国地方分离株SD9901、HA9901前病毒基因组cDNA为模板，通过PCR技术，成功地从国内分离的2株REV毒株中扩增出env基因，并将其克隆到pUCm-T载体中测序。将所得序列与SNV株进行比较，分析其同源性。结果表明：在核苷酸水平上，参考株SNV株的env基因与2株中国分离株的同源性分别为97.7%和95.0%；在氨基酸水平上，其同源性分别为96.9%和92.7%。分析进化关系，HA9901变异较大。