产气荚膜梭菌ε毒素研究进展

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患细菌性传染病病原,在自然界中分布极广,一定条件下可引起多种疾病.该菌常通过其外毒素危害人和动物机体,所产毒素主要有α、β、ε和ι4种外毒素.根据毒素产生的情况,将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D、E、F和G7个型.ε毒素毒力最强,主要由B型和D型菌分泌.论文通过致病机理、病理变化、流行特点...     

产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体的免疫保护力评价

旨在获得产气荚膜梭菌ε毒素的重组突变体,并评价其毒力及免疫原性。对已知的D型产气荚膜梭菌ε毒素编码基因进行了优化设计和人工合成,同时引入3个氨基酸点突变:第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,第106位组氨酸突变为脯氨酸。将该基因片段克隆至原核表达载体pET30a-(+)中进行表达,并纯化。利用Western blot方法检测纯化蛋白质与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清的反应性,并检测其对小鼠的毒力。随后,以纯化的重组蛋白质免疫兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。结果表明,ε毒素的重组突变体为可溶性表达,通过灰度扫描,其表达量比例可达40%;该蛋白质能与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清反应,小鼠安全试验显示,6.25×106 ng·kg-1的蛋白质仍无毒力;免疫兔血清对D型产气荚膜梭菌ε毒素的中和效价在一免后可达50~60最小致死量(MLD),二免后可达400~450 MLD;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组4/4死亡,免疫组得到保护。由此表明,产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体无毒力且保留了良好的免疫原性,为D型产气荚膜梭菌病新型疫苗的研制提供了重要的实验数据。     

支原体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究

为探究支原体液体培养基和固体培养基质控菌猪鼻支原体生长规律,以活菌浓度,菌液pH值为指标,比较了不同代次与不同传代方式猪鼻支原体生长情况。结果显示:3%与10%浓度传代,0~48 h内,活菌浓度持续上升,菌液pH值持续下降,3%浓度传代的支原体生长较均匀,更利于菌种生长;1~5代支原体活菌浓度无显著差异;通过0.3 mL菌液加9.7 mL培养基传代,20组菌液平均浓度为(24.4±5.7)×10~8CFU/mL,通过0.9 mL菌液加29.1 mL培养基传代,菌液平均浓度为(7.2±2.1)×10~8CFU/mL,两种浓度差异极显著,前种传代方式更有利于支原体生长。本次试验为支原体液体和固体培养基的质控工作标准化提供参考。     

羊口疮实验室检测方法研究进展

羊口疮是由羊口疮病毒(Orf Virus,ORFV)引起的嗜上皮性人畜共患传染病。该病在国内外均有流行,对养羊业造成了巨大的经济损失。快速高效的检测方法对羊口疮的防治至关重要,目前常用的羊口疮实验室检测方法包括病毒分离鉴定、病毒中和试验（VNT）、酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）、琼脂扩散试验（ATD）、蛋白质印迹法（WB）、侧流免疫层析测定法（LFIA）、聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR(qPCR)等。本文概述了ORFV实验室检测方法的研究进展,为快速、准确的诊断ORFV提供依据。     

不同钝化剂对水稻Cd吸收的影响

通过田间试验,研究生石灰(3.00、3.75 t·hm^-2)、海泡石(12.00 t·hm^-2)及石灰-海泡石复合(6.00 t·hm^-2)4个钝化剂处理对低积累早稻品种Cd吸收的影响。研究表明,不同钝化剂处理与对照相比籽粒中Cd的含量均显著降低,降幅在60.0%~72.5%,且水稻籽粒中Cd含量均<0.2 mg·kg^-1。其中,海泡石效果最佳,石灰次之。各钝化剂的添加均显著提高了土壤pH值,其中,12.00 t·hm^-2海泡石处理效果最佳,pH增加了1.7;其次为3.75 t·hm^-2生石灰处理,pH增加1.1;6.00 t·hm^-2石灰-海泡石复合钝化剂和3.00 t·hm^-2生石灰处理的土壤pH分别增加0.9和0.7。不同钝化剂处理土壤有效态Cd含量显著降低,降幅在64.9%~93.2%。其中,海泡石处理的土壤有效态Cd的降幅最高,其次为3.75 t·hm^-2生石灰处理,降幅为74.2%。除3.75 t·hm^-2生石灰处理外,其他钝化剂处理对土壤有机质和主要养分含量无明显影响。3.75 t·hm^-2生石灰处理显著降低了土壤碱解氮和有效磷含量,降幅分别为20.7%和21.0%。水稻籽粒中,Cd含量的降低主要是由于钝化剂的施入提高了土壤pH,进而降低了土壤有效态Cd含量。本研究表明,施用生石灰、海泡石等钝化剂能显著降低水稻籽粒中的Cd含量,而原位钝化结合低积累品种的种植是实现受污染耕地安全利用和稻米安全生产的有效措施。     

犬细小病毒BJ06/06株致病模型的初步建立

犬细小病毒在全国乃至世界范围内广泛流行,而现阶段常用的疫苗对新变异毒株的预防效果并不理想。在新型疫苗的研发过程中,亟需建立评价动物免疫效果的流行毒株攻毒标准。通过对比格犬进行犬细小病毒流行毒株的人工感染试验,从临床症状、血液生化和病理变化等对患病犬进行多维度的综合评价。结果显示,患病犬均表现出了典型的体温升高、呕吐、精神沉郁、腹泻、血便等临床症状,白细胞数量显著降低,血浆白蛋白含量降低、碱性磷酸酶和血清磷含量升高,且不同攻毒剂量组间有显著差异。本研究初步建立了犬细小病毒(BJ06/06株)的致病模型,接种方式为每只比格犬灌服5 mL病毒液(10^4.5TCID₅₀/0.1mL),同时左右后肢各肌肉注射1 mL病毒液。本模型为后续犬细小病毒病新型疫苗的研发和免疫效果评价提供了参考依据。     

应用LSDV-ELISA抗体检测试剂盒检测羊痘疫苗免疫牛血清抗体水平

目前国内尚无商品化的牛结节性皮肤病疫苗,对于该病的防控,我国采用羊痘疫苗进行紧急免疫。为了验证牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒对羊痘疫苗免疫血清抗体水平检测的适用性,本研究采用实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒和病毒中和试验对羊痘病毒活疫苗免疫血清、在研牛结节性皮肤病灭活疫苗（山羊痘AV41株）免疫血清进行抗体水平评价。结果显示,对于羊痘活疫苗免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对免疫15d抗体阳性率分别为84.4%和75.6%,免疫30d抗体阳性率分别为100%和95.6%,免疫60d抗体阳性率分别为97.8%和91.1%;与病毒中和试验符合率为86.1%。对于牛结节性皮肤病灭活疫苗（山羊痘AV41株）免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对一免28d抗体阳性率分别为64%和56%,二免28d抗体阳性率分别为94%和88%,二免42d阳性率均为100%;与病毒中和试验符合率为86.5%。试验证明,实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验符合率较高,检测结果较为一致,且本试剂盒敏感性高于病毒中和试验。因此本试剂盒可用于...     

产气荚膜梭菌ε毒素重组突变体大肠杆菌表达条件的优化

为优化产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的表达条件,以前期构建的产气荚膜梭菌ε毒素重组突变体为基础,通过控制变量法确定诱导温度、诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导时菌液浓度等原核蛋白表达条件.结果表明,ε 毒素的重组突变体在37℃、菌液OD600值为0.895～1.295,1.6 mM IPTG诱导6 h条件下可溶性表达量最高...     

重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析

本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白（MBP）和C型肉毒梭菌毒素重链C末端（CH_C）的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCH_C。将GMBPCH_C克隆至pET28a-（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCH_C。将rMBPCH_C与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100 μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCH_C在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素（简称天然毒素）的中和效价均可达到1（0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量（MLD）的天然毒素）。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%（2/2）死亡。以上结果说明,rMBPCH_C具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。     

一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体的制备及鉴定

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞（命名为3E10）,经3次亚克隆后制备腹水并进行纯化鉴定。结果显示：该杂交瘤细胞连续传代20代后细胞上清液的IFA效价仍不低于1:40。纯化后的单克隆抗体腹水浓度为0.204 mg/mL,亚类鉴定为IgM,且未发现有中和活性。特异性检测显示3E10单克隆抗体能与2株PRRSV NADC30-like毒株发生荧光反应,而与4株高致病性PRRSV疫苗毒株、2株经典株PRRSV疫苗毒株以及CSFV、PCV2、BVDV及Marc-145细胞均无荧光反应,显示出较好的应用前景。