新兴猪干扰素-β基因的分子克隆与序列测定

根据NCBI GenBank 上登载的猪干扰素β基因序列(S41178),设计一对引物,直接从猪肝脏提取基因组DNA,经PCR 扩增及扩增产物的克隆、测序,获得了新兴本地猪干扰素β全基因片段,其大小为561 bp,与NCBI GenBank上登载的猪干扰素β基因序列完全一致,为进一步研究和开发猪基因工程干扰素制剂奠定了基础。     

新兴猪IL-18成熟蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的猪白细胞介素18(pIL-18)基因序列，设计了1对特异引物。利用RT-PCR对从3周龄新兴仔猪脾细胞中提取的总RNA进行了扩增，获得了约500bp的片段。将该片段克隆、鉴定、测序，证实已获得了新兴猪IL-18成熟蛋白基因片段，其大小为474bp，编码157个氨基酸，与GenBank上登录的猪IL-18成熟蛋白基因序列完全一致。     

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。     

猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。     

鸡附红细胞体与白色念珠菌混合感染的研究

对某鸡场送检病、死黄羽肉鸡进行实验室诊断,在血液中检测到附红细胞体,同时从病鸡的嗉囊、腺胃分离出一株白色念珠菌。通过体外培养和杀灭试验分别筛选出对附红细胞体敏感的药物磺胺间甲氧嘧啶、附红净和对白色念珠菌敏感的药物制霉菌素、氟康唑。     

新兴猪γ-干扰素基因克隆及其真核表达质粒的构建

为研发猪γ-干扰素(interferon-gam-ma,IFN-γ)制剂,根据已发表的猪IFN-γ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR技术从3周龄新兴猪脾细胞中扩增出约500 bp的基因片段;将其片段连接到pMD18-T载体,经PCR、酶切及序列测定表明,该基因片段由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,与NCBI GenBank上登载的猪IFN-γ基因序列完全一致。新兴猪IFN-γ基因的成功克隆及真核表达质粒的构建,将为进一步研发猪干扰素制剂奠定了基础。     

鸡附红细胞体与白色念珠茵混合感染的研究

对某鸡场送检病、死黄羽肉鸡进行实验室诊断,在血液中检测到附红细胞体,同时从病鸡的嗉囊、腺胃分离出一株白色念珠茵.通过体外培养和杀灭试验分别筛选出对附红细胞体敏感的药物磺胺间甲氧嘧啶、附红净和对白色念珠菌敏感的药物制霉菌素、氟康唑.     

瘟疫苗对产鸽生产性能的影响

选取５００对健康杂交王鸽，随机均分为５组（各组存栏蛋数、乳鸽数量及日龄一致），进行接产鸽新城疫疫苗和鸽Ⅰ型副粘病毒油乳剂灭活苗对产鸽生产性能影响及免疫效果试验。第一组：每只产鸽羽下肌注鸡新城疫I系活疫苗１头份；第二组：每只产鸽羽下肌注鸡新城疫I系活疫苗２头份；第三组：每只产鸽颈中部皮下注射鸽Ⅰ型副粘病毒油乳剂灭活苗０．５mL（１头份）；第四组：每只产鸽颈中部皮下注射油乳剂灭活苗１．０mL（２头份）。第五组：对照组，不注射疫苗。注射疫苗后三个月内，统计各组的产蛋、生产乳鸽、无精蛋、死胚及乳鸽死亡数。结…     

大肠杆菌O157:H7 rfbE基因和fliC基因的克隆与序列分析

根据已发表的E．coli O157：H7 EDL933株的rfbE基因和fliC基因，设计了两对引物，分别对两个O157：H7，菌株的rfbE基因和一个菌株的fliC基因进行PCR，并将PCR产物克隆于pMD18-T栽体质粒。测序结果表明，获得到了与理论相符的582bp rfbE基因片段和802bp fliC基因片段。一株菌的rfbE基因存在无意义突变（两个）。而另一株菌fliC基因有一个有意义突变（aac→gac）     

鸽瘟疫苗对产鸽生产性能的影响

选取500对健康杂交王鸽,随机均分为5组(各组存栏蛋数、乳鸽数量及日龄一致),进行接产鸽新城疫疫苗和鸽Ⅰ型副粘病毒油乳剂灭活苗对产鸽生产性能影响及免疫效果试验.