运用随机扩增多态性和质粒指纹图谱法进行大肠杆菌O157的分子多态性分析

为了解大肠杆菌O157分离菌株的分子特征,建立了随机扩增多态性和质粒指纹图谱2种分型方法,对10株从粪便和动物组织分离的大肠杆菌O157进行了分型研究,结合主要毒力基因的检测和药敏试验,以进一步验证分离菌株之间的亲缘关系.随机扩增多态性分析分别在遗传距离为0.89、0.973处将所有细菌分类:其中有2株菌株具有相似的扩增图谱,可以聚为同一类,亲缘关系较近,其余8株细菌类聚为两大类.质粒图谱分析在不同的进化距离处将所有细菌分类,形成具有复杂分枝的树状图.毒力因子检测结果显示:10株分离菌株均含有hly、eae、uid、flich7基因.药敏试验幸明:其中2株细菌具有不同于其他8株细菌的耐药谱,与随机扩增多态性分析和质粒图谱分析相一致.比较随机扩增多态性和质粒指纹图谱2种分型方法发现:它们虽具有相似的结果,但质粒图谱法分析更能反映出菌株之间的亲缘关系.     

从血凝块中提取DNA的快捷方法

将7 mL全血去血清后的血凝块用携带不锈钢均质头的均质器裂解后,加入红细胞裂解液处理至无血凝块存在,得到1 mL左右的白细胞提取物,可较完全地去除红细胞成分。白细胞提取物提取的DNA成分经凝胶电泳分析,可得到较清晰的DNA条带。用牛特异性引物从所有血凝块扩增出271 bp的牛特异性条带,用血凝块处理后的细胞沉淀添加病毒悬液提取的DNA作BHV1病毒gB-PCR检测,结果显示添加BHV1的血凝块样品均出现478 bp的BHV1-gB特异性条带。     

免疫磁珠分离胸膜肺炎放线杆菌的研究

为尝试从混合样本中提高胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)的分离率,实验优化各种条件,将多种磁珠的表面连接抗AppS1或S2血清型的IgG,制备成免疫磁珠,测定各种免疫磁珠特异性捕获细菌的富集效果。结果表明各种磁珠均能特异性富集相对应的细菌,与直接分离培养相比,提高混合样本和人工模拟样本中特异性目标细菌的分离率,但各种磁珠的最佳反应体系不同,如磁珠与抗体的结合量、菌液与免疫磁珠的最佳体积比。试验中100μLS1425S磁珠与20μL的IgG结合,菌液浓度为106CFU·mL-1时,100μL菌液与50μL免疫磁珠的作用体系免疫富集效果最佳。这为推广使用免疫磁珠提高App分离率提供科学依据。