果蔬农产品应急物流体系优化研究

在探究应急物流与果蔬农产品应急物流概念的基础上,分析了果蔬农产品应急物流体系的基本现状,指出目前果蔬农产品应急物流体系存在一些缺陷,包括人们对应急物流的认识程度不够、果蔬应急物流基础设施不完善等。提出了相应的优化建议:政府应对应急物流的重要性进行相应的宣传,强化物流设施以及物流中心建设,加强物流信息化与现代化建设,建立应急物流预警与预案。     

PPL 公司简介

PPL Therapeutics是由美国投资 ,利用英国罗斯林研究所 (Roslin Institute)的人才和技术成立的生物药学公司。它在利用转基因技术生产人类蛋白方面处于世界领先地位 ,与罗斯林研究所合作研究成功世界首例克隆动物绵羊多莉 (Dolly)之后 ,又研究出了世界首例基因敲除家畜 (绵羊丘比特 Cupid和戴安娜 Diana)、首例克隆猪 ,继而又生产出了世界首例转基因克隆猪PPL公司简介@周虚     

世界首例转基因克隆猪在英国诞生

英国的 PPLTherapeutics公司于 2 0 0 1年 4月 1 1日宣布 ,世界首例转基因克隆猪诞生 ,5头健康的克隆仔猪均含有外源标记基因。这是该公司 2 0 0 0年宣布世界首例克隆猪诞生之后又一重大成果。这次的克隆猪所不同的是 ,它们是由经过遗传修饰的体细胞核产生的。这一工作的成功进一步证明了生产基因敲除 ( knock-out)猪的可行性。这种基因敲除猪含有特异性的基因 ,可使人对猪器官产生排斥作用的免疫系统失活。 PPL公司此前曾报道过在猪细胞成功敲除靶基因 ,所用技术为该公司的专利技术 ,也就是他们生产转基因克隆绵羊丘比特 ( Cupid)和戴…     

湖南省休闲农业发展的问题与对策

从乡土性、季节性、多功能性、综合效益性4个方面总结了休闲农业的特性,认为休闲农业功能主要是教育功能、游憩功能、社会功能、经济功能。分析了湖南省休闲农业的成就和优势,认为湖南省休闲农业初步实现了休闲农业多样化、发展势头强劲、管理逐步完善,其主要优势在于丰富的乡村景观资源、客源市场以及道路与交通的改善。总结了湖南省休闲农业存在的主要问题,即规划不科学、专业人才匮乏、管理与服务不规范、产业链条不完善、营销意识与手段欠缺,在此基础上提出休闲农业发展的对策,强调科学规划、因地制宜,加强内部管理,提高服务水平和综合效益,促进产业升级,加强营销力度。     

ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6～10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。     

小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10~7 TU/mL～10×10~7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显著抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%～90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。