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根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF/ab)的基因(fedF/ab)序列,设计了1对引物,利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107/86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列,并克隆至pGEM—T载体,获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析,6个重组质粒的大小均为903bp,与fedF/ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107/86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同;只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异,D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明,所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。 相似文献
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猪圆环病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备 总被引:1,自引:1,他引:0
以大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组衣壳蛋白(GST-CAP2)为抗原,以一定的免疫程序接种BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按常规杂交瘤技术进行融合.以GST-CAP2以及猪圆环病毒1型(PCV1)重组衣壳蛋白(GST-CAP1)为包被抗原,经间接ELISA筛选获得2株能稳定分泌针对PCV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(M1和G1).通过dot-ELISA、Western-blotting以及间接免疫荧光(IFA)技术证明G1株分泌的单抗同时识别PCV1和PCV2, 而M1株分泌的单抗则特异性针对PCV2.该单抗的制备将为进一步建立快速检测PCV的方法奠定基础. 相似文献
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鹅源大肠埃希菌的分离与鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
从临盏床疑似大肠埃希菌感染的病雏鹅的组织分离到31株细菌,通过培养特性和生化试验确定其中27株为大肠埃希菌。血清学试验表明,其中7株(25.93%)为026型,6株(22.22%)为078型,4株(14.81%)为01型,3株(11.11%)为018型,2株(7.41%)为0117型,5株(18.52%)未能定型。应用PCR方法检测了27株大肠埃希菌的F1菌毛与毒力岛HPI基因,结果表明24株(88.89%)为F1^+大肠埃希菌,7株(25.939/5)为HPI^+大肠埃希菌(其中4株为F1^+)。药敏试验表明,所有菌株均对头孢唑林、呋喃妥因敏感,部分菌株对庆大霉素、环丙沙星敏感,而对多黏菌素、四环素、林可霉素均为耐药。 相似文献
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为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。 相似文献
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利用PCR技术 ,分别从产F18ab菌毛的猪水肿病大肠杆菌分离株G及产F18ac菌毛的大肠杆菌 8813株中扩增出 5 10bp左右的F18菌毛A亚单位基因 (fedA)。将这 2个PCR扩增产物按预定阅读框架克隆入pGEX 6p 1载体的谷胱甘肽S 转移酶 (GST)基因的下游 ,筛选获得阳性重组质粒 ,并对质粒中的插入序列进行测定。序列分析表明 :F18ab与F18ac的fedA基因的核苷酸序列同源性为 97.6 % ,推导的氨基酸序列同源性为 94.7% ,两者的主要区别在于F18acfedA基因的第 36 3bp处比F18ab多 3个核苷酸 ,并出现一个新的酶切位点 (NgoMI) 相似文献
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根据已经发表的F18ab菌毛A亚单位(FedA/ab)的基因(fedA/ab)[1],设计一对引物,利用PCR技术从表达F18ac菌毛的大肠杆菌2134P株[2]、8199株[3]、8813株[3]中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒T2134PA、T8199A、T8813A.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该3个序列大小均为516bp,与fedA/ab(513bp)具有较高的同源性,分别为96.3%、96.5%、95.9%,推导的Fed/ac氨基酸序列与FedA/ab同源性分别为93.0%、93.6%、92.4%.数据表明该实验所克隆的序列均为F18ac菌毛A亚单位(FedA/ac)的基因(fedA/ac). 相似文献
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采集江苏省不同地区15个鸡场的疑似大肠杆菌感染病例的病料,通过细菌学分离鉴定,共获得45株大肠杆菌,并确定了O78(53.33%)和O109(28.89%)为优势O抗原型。根据Pap菌毛基因设计1对引物,根据文献报道合成2对引物,分别用于Pap菌毛、F1菌毛以及毒力岛HPI的基因检测;通过对45株大肠杆菌分离株的PCR扩增,确定了7株(15.56%)为F1+大肠杆菌,1株(2.22%)为F1+Pap+大肠杆菌,22株(48.89%)为F1+HPI+大肠杆菌,4株(8.89%)为F1+Pap+HPI+大肠杆菌,5株(11.11%)为HPI+大肠杆菌,未发现Pap+菌株。选用7种临床常用的抗菌药对全部菌株进行药敏试验,结果表明:绝大多菌株对呋喃妥因、头孢唑林、多黏菌素B敏感,对环丙沙星和庆大霉素因菌株差异而异,林可霉素、四环素多不敏感。 相似文献
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