过表达ZmIBH1-1提高玉米苗期抗旱性

【目的】干旱是严重影响玉米生长发育进程的一个重要因素。挖掘玉米抗旱相关基因,通过转基因功能验证和转录组分析,解析关键基因在响应干旱胁迫过程中的分子调控机制,为抗旱分子育种和遗传改良提供理论依据。【方法】以玉米自交系B104（WT）为背景材料,利用农杆菌介导方法构建过表达ZmIBH1-1转基因株系（ZmIBH1-1-OE）;通过对转基因植株进行草铵膦抗性筛选、标记基因和目的基因PCR检测,以及运用实时荧光定量PCR检测目的基因的表达情况,鉴定阳性植株和株系;以WT和ZmIBH1-1-OE转基因株系为材料,通过干旱处理（20% PEG6000）,进行表型鉴定和耐旱生理生化指标测定,验证ZmIBH1-1的抗旱功能;通过对干旱胁迫下玉米4叶期转录组的比较分析,鉴定出差异表达的基因（differentially expressed genes,DEGs）;结合DAP-seq（DNA affinity purification sequencing）分析,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的下游靶基因,利用基因组可视化软件IGV（integrative genomics viewer）分析ZmIBH1-1蛋白结合候选靶基因的位置,然后通过Dual-Luciferase试验验证ZmIBH1-1蛋白与靶基因的调控关系。【结果】通过玉米遗传转化获得12个转化事件;T₃代中,能同时检测到标记基因Bar和目的基因ZmIBH1-1的植株有458个,实时荧光定量PCR检测结果表明,ZmIBH1-1-OE中ZmIBH1-1的表达量显著高于WT,株系3和株系8表达量最高,将其自交获得T₄代转基因株系用于后续试验。在干旱胁迫条件下,ZmIBH1-1-OE株系存活率、叶片相对含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量及其生理生化指标（超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性）均显著高于WT,说明玉米中过量表达ZmIBH1-1赋予玉米更高的耐旱性。转录组分析结果表明,WT与ZmIBH1-1-OE株系在干旱胁迫下有1 214个差异表达基因;Gene Ontology（GO）功能富集分析结果表明,差异表达基因主要涉及生物过程、细胞组分和分子功能,如在生物过程中主要涉及到光合作用、应激响应、脱水响应等;KEGG富集分析表明,差异表达基因主要参与植物激素信号传导、新陈代谢等过程。结合转录组显著差异表达基因和DAP-Seq分析所得到ZmIBH1-1蛋白的靶基因,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的11个候选靶基因,包括2个钙信号相关基因、3个半胱氨酸代谢相关基因、1个bHLH转录因子、1个应激响应蛋白、1个谷胱甘肽转移酶、1个氧化还原过程蛋白和2个乙烯响应因子;基因组可视化结果显示ZmIBH1-1蛋白可以结合靶基因启动子区;随后通过Dual-Luciferase试验进一步表明,ZmIBH1-1蛋白可以直接作用于11个候选靶基因,其中,ZmIBH1-1蛋白可以促进ZmCa-M、ZmSYCO、ZmbHLH54、ZmGlu-r1、ZmCLPB3和ZmP450-99A2的表达,抑制ZmAGD12、ZmCYS、ZmCYSB、ZmERF-107和ZmEIN3的表达。此外,在干旱胁迫下NAC、WRKY、MYB等转录因子在ZmIBH1-1-OE和WT株系中也存在差异表达。【结论】ZmIBH1-1的过表达可以增强玉米苗期的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控乙烯信号通路中的ZmERF-107和ZmEIN3的表达提高玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控钙信号相关基因ZmCa-M和ZmAGD12增强玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白可能通过间接调控NAC、WRKY、MYB等转录因子响应干旱胁迫。     

琼胶酶水解琼胶产生琼胶寡糖的正交试验研究

利用从产自广东省南澳岛的腐烂龙须菜中发现的一种弧菌属(Vibrio sp.)细菌ZQM2017,对该菌株所产琼胶酶水解琼胶制备琼胶寡糖的工艺进行了优化,根据前期实验,选取底物浓度、温度、转速、时间,考虑上述四因素对酶解的影响,以还原糖浓度为指标来评价酶水解效果,设计了四因素三水平正交试验。研究表明:1、四个因素对还原糖浓度都有显著的影响,其中转速影响最大;2、酶解法制备琼胶寡糖的优化工艺条件为:底物浓度3g/L,温度45℃,转速200r/min,时间150min。这一优化工艺的建立可为今后利用酶解法制备琼胶寡糖的工业化生产提供参考。     

柑橘皮渣在动物饲料中应用的研究进展

柑橘皮渣是柑橘加工业的副产物,占柑橘鲜重的45%~60%,其营养丰富,富含纤维、色素、抗氧化物质等,在动物的营养和免疫方面具有极大的利用价值。将柑橘皮渣用作饲料不仅可以提高动物生产性能、促进机体免疫及畜产品品质,而且可以解决其带来的环境污染,降低饲料花费,缓解人畜争粮的矛盾。因此,本文就柑橘皮渣的营养特点及其在反刍动物和单胃动物饲粮中的应用进行综述,以期为柑橘皮渣在动物生产中的应用研究提供参考。     

黑刺粉虱防治效果及其主要体会

黑刺粉虱(Aleurocanthus spiniferusQuaintance)体小,常在叶背吸食汁液,其排泄物下落在成叶上能诱发煤病。该虫在茶区常见,一般为害较轻,但是防治不当的情况下,曾先后在安徽、浙江、湖南等省大面积茶园为害严重。福建省也于1981年8月间在罗源县洪洋乡朝阳村茶场400亩茶园严重为害,当时笔者提出防治方案,应用敌敌畏乳剂喷杀二次后,控制了虫情,煤病亦未再见。1987年6月间,邵武综合农场茅岗茶厂(简称茅岗茶厂,下同)2400多亩茶园由黑刺粉虱为害引起的煤病,其中为害严重的     

法院追加我为共同被告合理吗

我与同村的范某、徐某商量每人出资1万元买一台拖拉机跑运输。买拖拉机的钱均摊，将来赚了钱3人平分。范某说他有门路，能搞到便宜的拖拉机，于是我和徐某每人给他1万元让他去办。谁知3个月后，范某花了1．7万多元搞来一辆旧拖拉机，还说请客送礼花了两千多元，我很生气，跟他俩说我不干了，将来把我那1万块钱还我。后来我到北京打工了半年，     

红松与色赤杨混交林改土效果显著

红松阔叶混交林是长白植物区系顶级群落，由于长期受到人为采伐等非自然因素的干扰，现存量极少，代之形成了大面积红松、落叶松纯林和生产力低下的杂木林。红松人工纯林由于树种单一，导致林分的土壤肥力逐年下降。近年来，通过营造阔叶红松混交林、人工诱导阔叶红松林等措施，培育了大面积红松阔叶混交林，其中色赤杨与红松混交林是较为成功的一种混交林分，现将草河口地区红松与色赤杨混交林改土效果总结如下。     

拖拉机维护保养及常见故障的排除

拖拉机是大家非常熟悉的农用机械,我国也是拖拉机的使用大国.然而近几年来.拖拉机使用故障频繁发生,严重影响了拖拉机的寿命,阻碍了农村经济的发展为使拖拉机经常处于良好的技术状态,必须设法防止和减少故障的发生.除坚持按照使用说明书的规定维护保养外,在农闲时期的保养与维护也是预防拖拉机发生故障的重要措施之一.     

Dot-ELISA法检测鱼粉中沙门氏菌的研究

沙门氏菌是最常见的一种人兽共患性病原菌，它型别繁多，Bergey's系统细菌学手册记载有2022个血清型。WHO沙门氏菌研究和咨询协作中心报道，至1987年底已有2213个血清型。目前国际沙门氏菌中心实验室报道沙门氏菌约有255个菌型及变异型。Dot—ELISA法是Richard Hawkes等首创的一种新的免疫学诊断方法。该方法自建立以来，以其特异