鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因（eIF4A1）并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定e IF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源e IF4A1基因编码区（CDS）序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光（IFA）检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋...     

江西南昌地区“一村一品”一体化农业发展应用研究

"一村一品"特色经济体现科学的发展观念,对于现代农业发展以及新农村建设具有实际意义。在当前新的经济形势下,继续开展"一村一品"相关工作是推动农村经济发展的重要举措,也是实现农民增收的重要手段,同时也是增加农村经济技术水平的有效方式。"一村一品"方案的实施,不仅带动了落后农村地区经济的发展,而且在增加农民经济收益的同时可为社会主义现代化建设积蓄力量。发展"一村一品"经济,是实现农村经济发展方式的转变,推动农村经济结构调整的有效措施。对农业现代化建设、农村经济体制改革、增加农民经济收益、实现新农村建设等方面都起到积极主导作用。     

浅谈园林彩叶植物的色彩及在植物配置中的应用

随着城乡园林绿化事业的迅猛发展,人们对植物的欣赏提出了新的要求,多树种、多色彩、季相变化明显已成为当今园林发展的主旋律。据此,中国各地区根据当地气候条件,培育和引种了多种彩叶植物,这些彩叶植物枝繁叶茂,并且枝叶色彩绚丽,易于形成大面积的群体景观效果。因此,它极大地丰富了城市的景观色彩,成为目前园林绿化、美化的新宠。文章介绍了一些彩叶植物的色彩种类和彩叶植物在植物配置中的应用。     

试论金融创新与金融监管

金融创新与金融监管是一对矛盾体,本文主要从对金融创新的认识、对金融监管的理解、以及金融创新与金融监管的关系来阐述金融业务创新,对我国金融监管提出的挑战以及我国金融创新对金融监管带来挑战的化解方法。     

高压燃油系统电磁控制阀区域流动特性试验

研究了高压燃油系统单体泵电磁阀区域的流动特性.在电控单体泵泵体上设计了光学透视窗口,利用高速摄像仪器测量控制阀出口端的瞬态流动.对拍摄的图片进行灰度处理,获得了控制阀区域随时间变化的亮度曲线.分析试验结果得出:电控单体泵在控制阀区域出现空泡,形成两相流.由于高速燃油在狭小的控制阀区域流动,以及控制阀多次碰壁,挤压燃油导致空泡的产生.     

设施园艺物联网系统建设思路与功能分析

结合设施园艺生产管理需求,提出了设施园艺物联网系统原理与建设思路,分析了系统组成与功能特色。该物联网管控系统能实现设施园艺生产管理的智能感知、智能控制,使温室大棚内环境始终保持在最佳生长状态。     

狂犬病病毒GX074株P-MS20F突变体构建及其生长特性鉴定

【目的】明确狂犬病病毒(RABV)强毒株GX074的P蛋白和M蛋白第20位苯丙氨酸(Phe)替换至弱毒株r RC-HL的重组突变体在宿主细胞内的生长特性,为P蛋白和M蛋白转录复制机理研究提供理论依据。【方法】运用反向遗传技术以强毒株GX074的M蛋白第20位Phe替换弱毒株r RC-HL(GX074P)的M蛋白第20位丝氨酸(Ser),构建r RC-HL(GX074P-M^S20F)突变体感染性c DNA克隆并拯救病毒。以重组突变体感染BSR/T7-9细胞,进行多步生长曲线测定,比较重组突变体与亲本毒株的生长能力,采用Western blotting检测N蛋白、P蛋白和M蛋白相对表达水平,利用实时荧光定量PCR检测N基因、P基因和M基因的相对表达量。【结果】经RT-PCR和测序鉴定,拯救的突变体r RC-HL(GX074P-M^S20F)M蛋白第20位Ser成功替换为Phe。多步生长曲线测定结果显示,构建的重组突变体在感染24、48、72和96 h后,病毒滴度均高于亲本弱毒株r RC-HL和对照弱毒株r RC-HL(GX074PM1),平均约为亲...     

公墓丽影

她是一个年轻貌美的女孩,却整日生活在墓园里。她让生命定格,把生命的符号记录在没有生命的石头上。位于重庆南山山麓的龙园公墓,远离了城市的浮华与喧嚣,宁静得让人能感觉到自己心脏搏动的频率。来这里一年了,我用尖针般钢钻的跳跃,为一个又一个的逝者,留下了在世间的最后一抹     

日本茶道的渊源与演变

追溯中日两国文化交流的历史,中国茶传入日本大致可以分为三次。第一次是日本的平安时代(794-1192),由遣唐使把中国唐代的煮茶法带回日本;第二次是镰仓时代(1185-1333),日本佛教僧侣把宋代的点茶法传到了日本;第三次也就是当代。在第二次和第三次之     

狂犬病病毒GX074野毒株M基因重组病毒的拯救与鉴定

为了探究狂犬病病毒M蛋白功能区域对其生物学特性的影响,本试验将狂犬病强毒GX074株和弱毒rRC-HL株的M基因进行比对,运用反向遗传技术以弱毒rRC-HL株为母本,将强毒GX074株的P基因和部分M基因替换至rRC-HL株相应位置,构建出重组病毒的全长感染性cDNA克隆,并成功拯救重组病毒;经过RT-PCR扩增测序检测、测定多步生长曲线。结果表明,拯救的重组病毒序列与预期一致,其生长趋势与亲本毒株rRC-HL相似,复制增殖能力高于亲本强毒株。在前24 h重组病毒滴度高于亲本毒株rRC-HL,48 h后由于重组病毒引起严重细胞病变死亡,病毒滴度上升幅度减缓。与强毒株GX074、CVS相比,重组病毒复制能力明显高于强毒株,且重组病毒可引起细胞病变,而强毒株不引起细胞病变。