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新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用TaqMan方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5~10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株。 相似文献
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针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt~2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt~5155nt片段(含完整1D~2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。 相似文献
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非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a—VP7转化BL21(DE3),经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-EuSA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0.25μg/mL,血清的最佳稀释度为1:40,待检血清阳性临界值初步定为0.25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。 相似文献
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1991年6月17日至21日在巴黎国际兽疫事务局(OIE)总部召开了第二届蓝舌病、非洲马瘟及有关环状病毒的国际专题研讨会,有近160人参加这次会议。与会的科学家、管理专家和生产部门的权威讨论了这些病目前的状况,科学地提出了有关制定管理制度方面的合理化建议,并确定了研究重点。会上重点讨论了蓝舌病、非洲马温、流行性出血热、马的器质性脑病及能在家养和野生反刍动物和马科动物中引起疾病的Palyarn病毒。 相似文献
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牛纤维乳头状瘤病毒(BPV)是导致牛纤维乳头状瘤的病原。国外根据发病部位将BPV分为6个血清型(BPV1—6),并且认为不同血清型的病毒DNA有差异,且对组织的特异性不同。根据临床症状和病理变 相似文献
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禽流感病毒多重荧光RT-PCR检测技术的建立与初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
国内外检测禽流感病毒最常用和经典的方法是鸡胚病毒分离,该方法是O IE推荐的方法,但是耗费时间长。为缩短检测时间,目前我们已成功建立了灵敏、特异的荧光RT-PCR检测方法,并已经应用于活禽、禽组织及环境中禽流感病毒的快速检测与H 5、H 7、H 9亚型的分型鉴定。鉴于我国2004年年初暴发H 5N 1亚型禽流感疫情,以及高致病力禽流感通常由H 5和H 7亚型引起,因此在平时疫情检测和实施扑灭措施时对这些病毒亚型进行快速检测和定型非常重要,在本研究中,为能进一步提高检测效率,节约成本,我们进一步研制开发的H 5/H 7和H 5/N 1多重荧光PCR… 相似文献
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牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5'UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1%,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染. 相似文献
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IPMA检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究 总被引:11,自引:2,他引:11
本研究在国内首次成功地建立了免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体。应用IPMA检测了北京地区3个猪场94份血清发现,英国株抗体阳性检出率为9.6%(9/94),美国株M1的抗体阳性检出率为51%(48/94)。同间接荧光抗体试验IFA比较阳性检出率基本一致。利用IF和IPMA两种方法检测182份加拿大进口猪血清均有3头阳性,且编号相同,本试验证实了IPMA是一种检测PRRS抗体的有效方法,可应用于PRRS的血清学检测 相似文献
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用差速离心法提纯PRRS病毒,利用NC膜作为载体,在国内外首次成功建立了检测PRRS血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)。抗原包被浓度为100μg/ml,被检血清工作浓度为1∶10,酶标兔抗猪IgG工作浓度为1∶600。对72份北京地区猪血清分别用Dot-ELISA和IF检测,Dot-ELISA检测阳性率为33.3%,IF检测阳性率为30.6%,与IF符合率较高,对部分待检血清检测结果表明:61份1991年进口美国猪血清阳性率为0%,182份1995年进口加拿大猪血清阳性率为4.94%。本法不需特殊仪器,适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查 相似文献