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为了研究猪细环病毒(Torque teno sus virus, TTSuV)的流行及遗传变异情况,试验采用PCR方法对从河南省南阳市某规模化养猪场采集的疑似TTSuV阳性猪的淋巴结、肺脏、血清等样品进行检测,并对TTSuV1阳性样品进行全基因组序列测定、同源性分析、遗传进化分析和基因重组分析。结果表明：试验成功从样品中鉴定出2株TTSuV1毒株,其全基因组序列长度分别为2 906,2 920 bp,分别命名为HeN1-A9株和HeN1-A11株。两毒株与GenBank中TTSuV1型参考毒株的同源性为68.8%～96.0%,与GenBank中TTSuVk2型参考毒株同源性为46.8%～47.6%,两毒株之间的同源性为86.4%。基于TTSuV1全基因组序列构建的遗传进化树分析,两毒株均属于TTSuV1c亚型;而基于TTSuV1第3段基因组序列构建的遗传进化树分析,两毒株均属于TTSuV1b亚型。两毒株均是重组毒株,以西班牙的G21株(GU570201)为亲本毒株,我国的LNJZ株(KT968712)提供重组片段,重组位点分别位于基因组2 195～2 530 bp和2 147～2 65... 相似文献
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【目的】通过建立过表达T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase, T7 RNAP)的慢病毒系统,构建可稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞株。【方法】根据GenBank中公布的大肠杆菌BL21(DE3)基因组中T7 RNAP基因序列(登录号：NZ＿CP081489.1)设计引物,并采用PCR扩增T7 RNAP基因片段,将其克隆至慢病毒载体中,构建pCDH-CMV-T7 RNAP重组质粒。筛选阳性克隆及测序鉴定后,利用脂质体将包含重组质粒pCDH-CMV-T7 RNAP的包装系统和辅助包装质粒共转染至HEK-293T细胞,进行慢病毒的包装及纯化,获得高病毒滴度的重组慢病毒。将收集的病毒液分别以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为1、5、10和20感染BHK-21细胞,72 h后观察荧光情况,筛选最佳MOI。将重组慢病毒在最佳MOI条件下感染BHK-21细胞,通过绿色荧光蛋白copGFP的表达观察感染细胞的阳性率。使用4μg/mL嘌呤霉素作为抗性筛选物进行多轮筛选,最终筛选得到BHK-21-T7 RNAP细胞株。进一步对所筛选的细胞株... 相似文献
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