靶向猪睾丸支持细胞PPP1CC基因siRNA的筛选与研究

本实验在验证PPP1CC基因在猪睾丸支持细胞ST内源性表达的基础上，针对PPP1CC mRNA靶序列设计并化学合成3段不同的siRNA序列，脂质体瞬时转染ST细胞，通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对ST细胞中PPP1CC的干扰效率。结果显示，转染24 h后，各实验组中PPP1CC mRNA表达量均显著低于阴性对照组，其中siRNA-1效果最佳。siRNA-1转染72 h后，PPP1CC蛋白表达量显著下降。本实验成功筛选出PPP1CC基因的有效干扰序列，为后续研究提供实验依据。     

猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体的构建

本文旨在研究猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA在猪睾丸支持细胞（ST）中的干扰作用。利用PCR法从ST细胞基因组中扩增猪睾丸ACE启动子,构建重组质粒ACE-pIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,通过红色荧光蛋白表达和双荧光素酶报告基因检测试验检测猪睾丸ACE启动子在ST细胞中的转录活性;根据SPAG6 mRNA靶序列设计合成3条siRNA序列,通过脂质体转染至ST细胞,利用实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA的干扰效率;基于人miR-30a结构设计SPAG6 shRNA,构建重组载体ACE-sh-SPAG6-pcDNA3.1,Western Blot检测其对SPAG6的干扰效果。结果表明,成功构建重组质粒ACEpIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,并证明猪睾丸ACE启动子在ST细胞中具有较强的转录活性;各试验组均能对靶基因SPAG6 mRNA的表达产生抑制作用,以siRNA-3的作用最佳。siRNA-3转染48 h后,SPAG6蛋白表达量显著下降（P<0.001）,成功筛选出SPAG6基因的最佳干扰序列;成功...     

LncRNA对胚胎发育的影响

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类转录本长度大于200 nt但无蛋白质编码能力的基因组转录产物。研究发现,LncRNA可以在转录前、转录及转录后水平调控基因表达,参与表观遗传修饰、X染色体剂量补偿及基因组印记等事件。胚胎发育是一个复杂且有序的过程,其受一系列事件影响,如母系到合子的过渡(maternal-to-zygotic transition,MZT)和合子基因组激活过程(zygotic genome activation,ZGA)等。目前研究认为LncRNA可以通过参与卵母细胞成熟与精子发生、ZGA以及调控胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)多能性等过程影响胚胎发育。综述了LncRNA在胚胎发育中的机制研究进展,为全面解析植入前胚胎中LncRNA异质性的产生机制及其与细胞命运决定的关联奠定基础。