猪繁殖与呼吸综合征病毒A06株单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合.经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D12、4E10、6E2和7G6.其细胞培养上清效价分别为1:256、1:512、1:512和1:256,小鼠腹水效价分别为1:1.024×106、1:2.048×106、1:1.024×106和1:2.048×106.亚型鉴定表明,3D12、4E10、6E2和7G6分别为IgG2b、IgG2b、IgG1和IgG2a.ELISA检测结果显示,4种PRRSV单克隆抗体仅与PRRSV反应,不与其他病毒反应,表明均为抗PRRSV的型特异性单克隆抗体.对单克隆抗体腹水液进行IgG提取纯化,SDS-PAGE电泳验证,仅出现两条清晰条带,无杂带出现,证明纯化效果较好.这4种单克隆抗体的获得,为建立PRRSV检测方法提供了强有力的工具.     

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。     

近年深圳口岸进境饲料检测情况及安全性浅析

本文收集了近几年经深圳口岸进境的饲料在牛羊源性成分和沙门氏菌方面的检测情况，分析不同来源和种类饲料的质量安全情况，归纳引起有关进境饲料潜在风险的主要因素，对进境饲料进行安全性浅析。根据分析结果，结合深圳局进境饲料的实际情况，对进境饲料的检测提出建设性意见，为进一步提高问题饲料的检出率，杜绝劣质和危险饲料经深圳局口岸进境提供技术支持。     

隐孢子虫和贾第鞭毛虫双重实时荧光PCR检测方法的建立

本研究根据隐孢子虫和贾第鞭毛虫相对保守序列,设计2对引物及其相应的Taqman探针,通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立了能同时检测隐孢子虫和贾第鞭毛虫的双重实时荧光PCR方法。所建立的隐孢子虫和贾第鞭毛虫双重荧光PCR检测方法的灵敏度为10-9,相当于46.1copies/!L,重复性好,特异性佳。本研究建立的双重荧光PCR技术,可以快速、准确地于一管一次反应检测隐孢子虫和贾第鞭毛虫。     

甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

自甲型H1N1(2009)流感病毒于2009年在世界多个国家暴发流行后,许多国家的猪群中检测到该病毒的存在,因此建立快速准确的甲型H1N1流感病毒的检测方法成为迫切需求。本研究针对甲型H1N1(2009)流感病毒NA基因设计特异性引物和探针,建立甲型H1N1(2009)流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间试验验证该方法在实际应用中的效果。结果表明:本研究建立的方法对检测甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的灵敏度达到10-6,与WHO推荐的A型流感病毒实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致,并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);该方法特异性强,与经典型H1N1和其他亚型流感病毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对,检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明,所建立的方法准确可靠。本研究所建立检测方法快速灵敏,检测结果准确可靠,适合用于甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。     

小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

本研究制备了针对小反刍兽疫PPRV全病毒特异性卵黄抗体,利用PPRV N蛋白特异性单克隆抗体和PPRV IgY为主要材料,建立了PPRV双夹心ELISA检测方法检测小反刍兽疫病毒。用该ELISA方法分别检测小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒、鹿流行性出血病病毒、水泡性口炎病毒、赤羽病病毒、口蹄疫病毒,结果表明该ELISA方法可以特异性检出PPRV而与其他病毒间无交叉。用该ELISA和RT-PCR同时检测162份临床样品,结果表明ELISA的特异性和敏感性分别为99.2%和93.7%,两种方法的符合率为98.1%。该方法的建立为小反刍兽疫病毒的初筛检测及小反刍兽疫流行病学调查提供了经济、快速、有效的方法,适用于设备条件不足的基层实验室。     

非洲猪瘟病毒p72蛋白的真核表达及反应原性鉴定

将p72基因克隆到载体pFast Bac/NT-TOPO上,转化大肠埃希菌DH5α。将获得的重组载体pFastBac/NT-TOPO-p72,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒质粒bacmid-p72。通过脂质体介导,将bacmid-p72转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染正常生长的sf9细胞,72h后收集细胞,超声破碎后取上清进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,重组蛋白大小约78ku,且重组蛋白可以与非洲猪瘟标准阳性血清反应。说明表达的重组蛋白为可溶性的,并具有良好的反应原性。     

家禽免疫抑制病液相芯片检测方法的建立

本研究针对传染性法氏囊病毒、鸡传染性贫血病毒、J亚型禽白血病病毒、马立克病毒1型基因组、新城疫病毒、禽流感病毒的特异性核酸序列,分别设计了6种病毒的特异性引物、通用扩增引物,及荧光编码微球包被用特异性探针。借助全新的通用扩增技术实现6种病毒核酸同时扩增,再与高通量的液相芯片检测相结合,进而实现4 h内6种病毒的快速准确检测。该方法创新性地将液相芯片技术GMPLex引入到动物检疫行业,突破了DNA病毒、RNA病毒不能同时检测及一次PCR不能完成检测的瓶颈,实现了一管一次PCR反应同时检测6种病毒,缩短检验周期,节约检验成本。     

世界动物卫生组织One Health总体框架及最新关注方向

近年来,人兽共患病在全球越来越多的地方影响人类和动物的健康。在此背景下,由联合国粮食及农业组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(WOAH)三方国际组织提出了“One Health”的概念。2021年底,FAO、WOAH、WHO和联合国环境规划署(UNEP)共同成立了One Health高级别委员会(One Health High Level Expert Panel, OHHLEP),并将“One Health”重新定义。论文就“One Health”的概念、提出的背景、重要发展进程、总体框架和协调机制以及未来应用展望进行了全面的介绍和阐述,为我国进一步深入了解“One Health”理念,实践并更好地应用“One Health”方法,从而解决我国人兽共患病、抗生素耐药等对人类、动物和环境危害严重的问题提供思路和参考。