RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析

为深入研究Ras同源基因家族成员A（Ras homolog gene family，member A，Rhoa）和环氧合酶2（cyclooxygenase 2，Ptgs2）分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用，试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆，构建真核表达载体并预测生物信息学功能。根据GenBank数据库中公布的RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因CDS区序列（登录号：JN971019.1和NM_011198）设计引物，提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA，经RT-PCR扩增Rhoa和Ptgs2片段并测序，将纯化的Rhoa和Ptgs2片段分别与线性化pcDNA3.1质粒相连接，对重组质粒进行测序分析和双酶切鉴定后，利用Lipofectamine^TM 2000转染293T细胞，经实时荧光定量PCR和Western blotting验证Rhoa和Ptgs2基因的表达情况，并应用生物信息学软件对Rhoa和Ptgs2基因进行预测分析。结果显示，试验成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达质粒；实时荧光定量PCR检测均在转录水平上表达；Western blotting可见Ptgs2蛋白在70 ku处有一明显条带，而Rhoa蛋白未出现条带。生物信息学预测显示，Rhoa和Ptgs2基因核苷酸序列相似性较高，在不同物种之间较为保守；Rhoa不具有信号肽，为不稳定蛋白，而Ptgs2在第17-18位氨基酸处存在信号肽，为稳定蛋白；Rhoa和Ptgs2蛋白分别有12和53个潜在的磷酸化位点；二级结构、三级结构均以无规则卷曲为主。本研究成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达载体，均在转录水平上表达，并分析了其生物学功能，为后续开展RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因在布鲁菌免疫机制方面的研究提供了工具。     

吉林省养殖场（户）新冠肺炎疫情防范及应急处置指南（第一版）

为科学指导新冠肺炎疫情期间畜禽养殖从业主体安全生产和个人防护,依据国务院和吉林省新冠肺炎疫情领导小组有关文件,结合吉林省农村地区新冠肺炎疫情防控工作实际,制定《吉林省养殖场（户）新冠肺炎疫情防范及应急处置指南（第一版）》,提出5项常规防范措施和3项紧急处置措施,用以及时控制、减轻和消除养殖场（户）发生人新冠肺炎疫情可能造成的危害,维护正常生产秩序,最大程度地减少新冠肺炎疫情对畜牧业发展造成的损失和影响。