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为研究ssc-miR-152生物信息学特征及对未成熟猪睾丸支持细胞功能的影响,本研究通过NCBI数据库确定ssc-miR-152在猪基因组中的位置,通过MethPrimer和EMBOSS在线软件分析ssc-miR-152上游序列CpG岛,使用Netural Network Promoter Predictio和Promoter-2.0预测其启动子区域,结合AliBaba 2.1和AnimalTFDB3.0软件预测其转录因子结合位点;Clustal W软件分析ssc-miR-152在物种间的保守性,采用CCK-8、流式细胞术和实时荧光定量PCR技术检测细胞增殖、周期及凋亡情况,运用miRanda、EIMMO、TargetScan和PITA在线软件预测ssc-miR-152的靶基因并取交集,并对预测的靶基因进行GO功能及KEGG通路分析,最后利用Cytoscape构建TF-miRNA-mRNA互作网络。结果表明:ssc-miR-152位于猪12号染色体反义链的24 292 249~24 292 328位置,其转录起始位点在上游序列200 bp处,启动子范围为393~4 619,并在该范围内... 相似文献
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睾丸未成熟支持细胞的增殖活性对种公畜繁殖性能有重要影响,睾丸基因组DNA甲基化(5mC)不同发育阶段特异性引起的基因差异表达可以调控支持细胞的增殖活性。在课题组前期研究中,SMAD6被鉴定出是睾丸发育过程中受3′UTR甲基化水平调控的枢纽基因之一,但其生物学功能尚未被发掘。本研究旨在探究SMAD6对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用。在体外培养的猪未成熟支持细胞中过表达SMAD6或干扰SMAD6表达后,检测细胞周期和增殖相关基因的相对表达量、细胞增殖情况、细胞ATP水平、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达情况。结果显示:过表达SMAD6后细胞周期及增殖相关基因的相对表达量上升(P<0.05或P<0.01)、细胞增殖增加(P<0.05或P<0.01)、细胞ATP水平升高(P<0.01)、细胞的凋亡率下降(P<0.05)、促凋亡相关蛋白BAX和Caspase3的表达降低(P<0.05);干扰SMAD6表达结果则与之相反。研究结果提示,SMAD6促进猪未成熟支持细胞的增殖且抑制其凋亡。 相似文献
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