产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,L.plantarum)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac-STa-LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac-STa-LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为12lb。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。     

高等职业师范院校分子生物学实验教学改革与实践

分析了高等职业师范院校分子生物学实验教学中存在的学时有限、设施不足、师资不够等问题。从实验教学内容、教学方法、考核方法3方面提出改革思路,即精心选择实验课程内容,用多种方法验证基础性验证实验和开展综合性实验;采用多媒体教学和体验式教学方法,充分有效利用课余时间;改变以往实验报告作为考评依据的形式,按照实验设计资料查询20%,实验论文15%,实验过程40%,自我评价10%,他人评价15%的赋分标准,进行实验考核。旨在提高学生的专业实践技能,培养学生的创新能力,进而提高学生的综合素质。     

植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建

乳酸菌宿主对表达载体的启动子具有高度的选择性,本研究利用PCR技术扩增嗜酸乳杆菌表面蛋白SlpA基因启动子,以诱导型表达载体pSIP409为基本框架删除其诱导型启动子,采用能快速连接的无缝克隆技术将SlpA基因启动子连接到gusA基因上游,获得重组质粒409SlpA电转化至植物乳杆菌NC8中,Western Blot定性测定的gusA表达情况,同时利用MRS-X-gluC培养基特异性显色反应来鉴定阳性重组子表达gusA的活性,为利用该启动子表达外源蛋白研制新型基因工程微生态制剂奠定基础。