牛源无乳链球菌分离及其诱导的乳房炎小鼠模型构建

研究旨在分离并鉴定致病性无乳链球菌并构建小鼠乳房炎模型。试验从病牛乳汁中成功分离并鉴定1株无乳链球菌(命名为HZ-032)。HZ-032以10⁴CFU菌量感染哺乳期小鼠,同时设相同剂量无乳链球菌ATCC 13813菌悬液组、阴性对照(等体积无菌PBS)组及空白组作为对照,观察攻毒后小鼠乳腺组织病变并进行组织细菌载量的测定;制作乳腺组织石蜡切片,经HE染色镜下观察组织病理变化;采用荧光定量PCR测定乳腺组织中IL-1α、IL-6、IL-10、TNF-α4种炎性因子相对表达量。结果表明,感染组小鼠乳腺组织可分离出大量HZ-032菌株;组织病理切片显示,感染后小鼠乳腺组织较阴性对照和空白组明显观察到乳腺上皮细胞溶解,腺泡内有大量中性粒细胞浸润;荧光定量PCR结果显示ATCC 13813和HZ-032处理组中IL-1α、IL-10、TNF-α表达量均显著升高(P<0.05),IL-6在HZ-032处理组显著升高(P<0.05)。本研究从患病奶牛乳样中分离1株致病性无乳链球菌HZ-032,并使用该菌成功构建小鼠乳房炎模型,为进一步研究无乳链球菌致乳房炎的相关致病...     

内肽酶O对马链球菌兽疫亚种突破血脑屏障的影响

运用同源重组法构建马链球菌兽疫亚种(SEZ) ATCC35246株(SEZ WT)pepO基因缺失株(SEZ△pepO)及互补株(SEZ C△pepO),比较分析pepO基因对SEZ形态特征、生长性能、感染小鼠的能力、小鼠全血存活率及小鼠脑组织定殖能力的影响;观察感染后小鼠脑组织的病理变化;选取人脑微血管内皮细胞(hBMEC)为体外血脑屏障模型细胞,测定pepO基因对hBMEC细胞的黏附侵袭能力以及对体外血脑屏障模型的穿透能力的影响。结果显示,pepO基因缺失后不影响SEZ在培养基中的生长速率,也不影响SEZ在小鼠全血中的存活率,但缺失株感染小鼠的能力显著降低(P<0.05),在小鼠脑组织细菌载量显著降低(P<0.05);SEZ WT株和SEZ C△pepO株感染组小鼠脑组织出现明显充血、出血、水肿的脑膜炎症状,组织切片可见大量出血及炎性细胞浸润,SEZ△pepO株感染组小鼠脑组织未见明显病变;SEZ△pepO对hBMEC细胞的黏附侵袭率以及对体外血脑屏障模型的穿透率较SEZ WT和SEZ C△pepO均显著降低(P<0.001)。本研究初步证明内肽酶O与SEZ毒力密...     

马链球菌兽疫亚种PepO蛋白原核表达及其免疫保护试验

以马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)ATCC35246株基因组为模板,根据NCBI数据库已公布的pepO基因序列设计引物进行扩增,利用同源重组技术连接至pCold-SUMO质粒进行原核表达及纯化,并以纯化的蛋白制备兔抗SEZ PepO多克隆抗体.将兔...