我国华东地区大肠杆菌、沙门氏菌分离和血清学鉴定

作为我国兽医临床耐药性监测计划的一个起步,对目前畜禽耐药菌株流行情况调查分析.2001年在华东地区选择了5个鸡场和1个孵化厂,进行3次追踪采样和抗菌药使用情况调查,共得到样品254份(泄殖腔拭子165份,饲料、水、尘土57份、饲养员粪便32份).分离到大肠杆菌80株,其中泄殖腔拭子有72株,分离率为43.6%;饲料、水和尘土有4份,分离率为7.0%,饲养员粪便有4株,分离率为12.5%.大肠杆菌0抗原血清型有35种,优势型不明显,O15型最多有8株,占10%.多为每个血清型有1～2株.共分离到沙门氏菌2株,血清型均为O9.所有鸡场采样前均使用过抗菌药.这次调查初步了解该地区抗菌药使用情况及两种细菌在该地区的存在状况和血清型分布,为下一步耐药性检测打下基础.     

猪细小病毒LAMP检测方法的建立

 【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的 LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。【结果】该方法在63℃恒温下作用45 min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23 TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼判断结果,与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过对20份临床样品的LAMP检测与免疫荧光鉴定、PCR方法比对,符合率均为20/20。【结论】本研究建立的PPV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单、设备要求低的特点,适合用于临床PPV快速检测。     

猪肺炎支原体膜蛋白P46基因在大肠杆菌中的表达

把猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)国际标准株232的P46基因克隆进pGEM-T-EASY载体上,通过PCR方法把该基因中三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG,然后将该基因亚克隆到载体pMAL-P2X上,得到重组表达载体pMAL-P2X-P46.用该重组载体转化大肠杆菌TB1,得到表达重组菌TB1-pMAL-P2XA-P46,用终浓度为0.3 mM的IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白MBP-P46,在免疫印迹试验中,兔抗MBP高免血清和兔抗猪肺炎支原体高免血清都能与目的蛋白发生阳性反应,证明猪肺炎支原体P46基因在大肠杆菌里获得了可溶性表达.该融合蛋白对于建立特异性和敏感性好的EIISSA方法具有重要意义.     

非典型性猪瘟的诊断和防制

作者从非典型猪瘟的表现形式入手,分析了其病因,并提出了防制措施.     

实验室人工感染诱发猪瘟野毒垂直传播

利用2头人工感染中等毒力猪瘟野毒耐过猪进行配种,诱发了猪瘟野毒垂直传播.带毒母猪于带毒后171 d产下9头仔猪,其中3头为死胎,6头为木乃伊.直接免疫荧光抗体试验和RT-PCR检测,9头均为阳性.测序结果表明,3头测序仔猪中,2头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的一致;另1头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的同源性高于与母猪所接种病毒的同源性.母猪在与公猪配种前后,其所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列发生了变化,配种后与公猪所分离病毒的一致,说明猪瘟病毒在猪体内的繁殖存在一定的优势选择现象.     

我国南方猪高热病的研究(Ⅰ)——大肠杆菌的分离、鉴定和致病性测定

从湖南3个高热病发病猪场11头病死猪的病料组织中均分离出了大肠杆菌,经血清学鉴定,鞭毛抗原(K88、K99、987P和F41)全为阴性反应。经过157种菌体抗原血清学检测,血清型为5、6、15、22、32和83型。药物敏感试验结果表明,分离的大肠杆菌对大多数常用药物耐药,对氟喹诺酮和头孢类药物敏感。将其中4头猪原代分离的大肠菌培养物以原倍(2×107个/mL)、104和108稀释的菌液分别感染18~22 g小白鼠,原倍菌液感染的小白鼠12/30在感染后24 h内出现死亡,而104和108稀释菌液感染的小白鼠均健活;将未经除菌的病死猪组织悬液、过滤除菌的组织悬液、大肠杆菌、过滤除菌的组织悬液及大肠杆菌分别感染30日龄左右的健康小猪,除未经除菌的组织悬液感染猪3/3发病,2/3死亡外,其余所有感染猪只出现体温升高,升幅达1~2℃,减食,精神萎靡,但没有死亡;将死亡猪再次分离到的大肠杆菌感染小白鼠和猪,小白鼠12/15出现死亡,感染猪只出现体温升高(超过1℃),没有出现死亡。结果证明:大肠杆菌在高热病的发病过程中只起协同诱发作用,引起猪发病死亡的真正原因可能是病毒感染。     

高致病性变异株引起的猪繁殖与呼吸综合征在我国的发生与流行

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种猪的高度接触性传染病，不同年龄、品种和性别的猪均能感染，但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感；该病以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率等为主要特征。该病1987年在美国的北卡罗来纳州首先发现，然后迅速向世界各地迅速蔓延，目前为止，世界上仅有少数几个国家没有该病的发生与流行，     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的严重危害世界养猪业的一种传染病,该病可造成猪的繁殖障碍、呼吸系统病症与生长受阻。本文着眼于PRRSV疫苗的免疫原性、保护效力和安全性,涉及市场上现有的商品化疫苗与已报道的处于试验阶段的相关疫苗研究成果,以期为PRRSV的防控与疫苗研发提供有益的参考。     

甲病毒载体的研究进展

甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺陷型载体和DNA/RNA载体。就这三类载体的改造过程进行了探讨,并对这三类载体的特点及其应用研究进展等方面进行了阐述,以期为开发出更安全、更有效的甲病毒载体提供参考。