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该研究旨在对D型流感病毒(influenza D virus, IDV)NP蛋白进行原核表达并制备多克隆抗体，为D型流感快速诊断技术奠定基础。采用PCR技术扩增D/bovine/Mississippi/c00046N/2014毒株的NP片段编码区，并对其序列进行跨膜区、信号肽、疏水键、抗原性及结构域分析，筛选出最优区段以制备多克隆抗体。该研究将IDV NP最优编码区序列插入原核表达载体pET-B2M,构建pET-B2M-NP重组阳性质粒，经PCR和测序鉴定后将重组阳性质粒转化至大肠杆菌TreliefTM 5α中；IPTG诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化重组NP蛋白，并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。序列分析结果显示，1～500氨基酸区段无跨膜区和信号肽序列，局部亲水性好且具备良好的免疫原性，为制备重组NP蛋白的最佳抗原区段。经测序验证构建了pET-B2M-NP重组阳性质粒，转化后经IPTG诱导，主要以包涵体的形式表达了相对分子质量大小约为72 kDa的蛋白，符合预期。间接ELISA结果显示，制备的多克隆抗体效价达1∶100000且免疫原性良好。Western blo... 相似文献
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