河北猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株N基因变异分析及原核表达

为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征提供理论数据。应用RT-PCR方法特异性扩增HB-3(cz)株的ORF7(N)基因片段,将扩增片段克隆入pMD-T载体后测序,应用DNAstar分析软件对序列进行分析,并与GenBank中发表的PRRSV毒株序列进行比较。结果显示:HB-3(cz)株与高热病毒株JXA1、HUB2等及传统河北分离株HB-1(sh)氨基酸同源性高达97.6%,属美洲型毒株。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,重组质粒pGEX-N转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达,经Western-blot-ting分析表明:表达的融合蛋白分子量约为39.5 kDa,能与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,为PRRSV血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

传染性法氏囊病病毒的培育与变异试验

近年来,传染性法氏囊病病毒(IBDV)毒株毒力不断出现变异,其中也有不少关于中国IBDV变异株的研究报道.为了弄清河北保定流行的IBDV致病性,掌握河北保定地区目前的IBDV流行现状,本试验采集来自河北保定的2个IBDV野毒株进行培育.将这两株IBDV进行病毒核苷酸测定后,再进行同源性的比较研究,用以确定IBDV在河北地区的致病特点与核苷酸的关系.     

盖他病毒的诊断及研究进展

盖他病（Getah,GET）是由披膜病毒科甲病毒属的盖他病毒（Getah virus,GETV）引起的主要侵害猪和马的一种虫媒传染病。盖他病毒可引起母猪繁殖障碍,导致妊娠母猪流产、产死胎或弱仔。该病毒在亚洲地区、澳大利亚北太平洋沿岸地区分布广泛,给家畜和养殖业带来了一定威胁。目前,针对盖他病毒的研究还较少,为此,笔者概述了盖他病毒的发现和分类、分子生物学特征、流行病学及临床症状、诊断技术等,拟为该病的深入研究提供相关的理论参考。     

鸡传染性法氏囊病毒3个毒株VP2高变区的基因扩增与序列分析

以用疫苗株V-hb和V1免疫后又发病的病鸡法氏囊分离毒株HeB-bdI的基因组RNA为模板,利用RT-PCR/Nested-PCR扩增出了cDNA产物.并对其VP2高变区基因序列测定,同时测定了V-hb和V1的基因序列.序列分析表明HeB-bdI毒株与UK661同源性较高为98.4%,而与弱毒株Cu-1、非致病性株PBG98和变异株相差较大;而疫苗株V-hb和V1疫苗株与HeB-bdI毒株的同源性较低仅为93.1%.     

鸡新城疫病毒地方株的分离鉴定及其遗传变异分析

从河北省保定地区发病鸡群中分离到2个具有血凝性的病毒株分别命名为HBA和HBB,其血凝作用可被NDV阳性血清抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS76阳性血清抑制,表明2个分离株均为新城疫病毒。通过测定MDT、ICPI和IVPI等方法鉴定分离株的毒力符合强毒标准。利用RT-PCR技术成功扩增了2株分离株的F基因片段(约540bp),通过测序及遗传变异分析表明两毒株之间的核苷酸同源性为87.7%,氨基酸同源性为91.6%,结合系统发育进化树分析表明HBA为基因Ⅵ型,HBB为基因Ⅶ型。     

浅谈家庭农场在农业技术推广中的作用

家庭农场属于一种新型农业生产形式,具有规范化、机械化、集约化、规模化的特征,能够促进农业技术的推广、工作质量的提高,因此,充分发挥家庭农场在农业技术推广中的作用至关重要。在实际生产中,我国农业技术推广工作虽然有了较大发展,但是受人为因素及外部客观因素的影响,依旧存在较多问题。文章主要阐述了家庭农场在农业技术推广中的作用,并提出了相关建议,以供参考。     

保定地区猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是为无囊膜单股环状负链DNA病毒,病毒粒子直径约17～20 nm,是迄今已知最小的动物病毒之一.PCV属于圆环病毒科圆环病毒属成员,根据其致病性及抗原性将它分为两个血清型,即PCV1和PCV2.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3（cz）杉ORF5基因序列分析及原核表达

从河北沧州分离到1株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经过4代盲传后,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为H13-3（cz）株。根据GenBank公布的PRRSV CH—1a株ORF5基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物（P1／P2）,用RT-PCR方法扩增完整ORF5基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒进行序列测定与分析。再设计另一对引物（P3／P4）从重组载体pGM—ORF5中扩增出缺失了N端28个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,并成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定了基础。     

河北地区猪圆环病毒二型ORF2基因片段的克隆与原核表达

以PCV2 PK-15细胞毒提取的DNA为模板,用PCR扩增PCV20RF2基因的后部约600 bp片段;对PCR产物回收纯化后与载体pMD19-T进行连接、转化,经酶切和序列分析后亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-ORF2,转入大肠埃希氏菌B121(DE3)中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting分析.结果表明.重组表达质粒在大肠中所表达的融合蛋白相对分子量为40 kDa,Western-blotting分析表明该蛋白具有PCV2抗原性.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF6基因的克隆及原核表达

从河北沧州分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经4代盲传,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为HB-3(cz)株。根据GenBank公布的PRRSV JXA1株ORF6基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物(P1/P2),用RT-PCR方法扩增完整ORF6基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒PGM-M进行序列测定与分析。后将克隆质粒PGM-M双酶切后连接原核表达载体pET-32a(+),在Rosseta-DE3中成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。