脂质体介导抗猪瘟病毒基因转染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

本研究旨在探索脂质体介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞的条件,为构建疾病模型动物及抗猪瘟病毒转基因猪提供技术平台。本研究比较了不同的小鼠胚胎成纤维细胞分离培养方法,将培养至3~5代的胚胎儿成纤维细胞,通过脂质体(LiPofectamine^TM 2000)介导转染抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo。结果显示,在所选用的不同浓度脂质体和重组质粒,以及不同转染时间的组合中,2 μL脂质体介导1.5 μg重组质粒,转染6 h时可获得19%的转染效率,极显著高于其他剂量和时间组合(P＜0.01)。这些结果表明,脂质体、重组质粒及转染时间的优化组合,能有效介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞。     

P450芳香化酶活性调控对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生的影响

［目的］探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。［方法］将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天检测小鼠睾丸和附睾的发育及精子的发生情况。［结果］①各试验组与对照组比较,体重增长率无显著差异;②0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,在灌服后的第15天睾丸系数显著减少（P〈0.05）,其他各试验组与对照组比较无显著差异;③各试验组与对照组比较,附睾系数无显著差异;④在第15和30天,0.006-0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,精子密度显著减少（P〈0.05）,其他各组与对照组无显著差异。［结论］该研究使用的来曲唑浓度,对小鼠体重增长率及睾丸和附睾的发育率无显著影响或影响很小,但是超过0.006 mg/kg浓度时抑制精子的发生,说明一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够直接影响精子的发生能力。     

昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究

本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5 d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5 d,细胞贴壁迅速,12 h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30 min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5~10 min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3~5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5 d胎鼠,胰蛋白酶消化5~10 min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3~5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。     

细胞色素P450芳香化酶活性调控对小鼠卵巢发育的影响

本研究旨在探索P450芳香化酶抑制剂（来曲唑）对小鼠卵巢发育的影响。将SPF级昆明系雌性小鼠随机分为对照组和2、4、6、8、10、30、50 g/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天观测小鼠卵巢的发育情况。结果表明：①在停药后第9、30天的6和8 g/kg组及第15天的4～10 g/kg组的卵巢指数显著高于对照组（P<0.05）,而停药后第15和30天的50 g/kg组显著低于（P<0.05）对照组和2~10 g/kg组;②在停药后第9和15天的4～8 g/kg组及停药后第30天的6 g/kg组的初级卵泡数显著高于（P<0.05）对照组和其它各试验组,而停药后第9天的30和50 g/kg组、第15天的50 g/kg组及第30天的10～50 g/kg组都显著低于（P<0.05）对照组和其它各试验组;③在停药后第9、15和30天的4～8 g/kg组的次级卵泡数都显著高于对照组（P<0.05）;而停药后第9天的30和50 g/kg组、第30天的50 g/kg组都显著低于对照组（P<0.05）;④在停药后第9天的4～8 g/kg组、第15天的6和8 g/kg组及第30天的2～8 g/kg组的成熟卵泡数都显著高于对照组（P<0.05）;而停药后第9天的10～50 g/kg组、第15、30天的30和50 g/kg组几乎没有成熟卵泡的形成。以上结果表明,用6 g/kg来曲唑浓度可一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性〖JP2〗雌激素合成,能够促进小鼠卵巢和卵泡的发育。