寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。     

广西地区犬细小病毒检测及VP2基因序列分析

为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件采用邻接法构建遗传进化树。结果表明：共获得55份CPV阳性血清样本,阳性率约为13.0%。PCR扩增得到大小约为1 755 bp的VP2基因。55株分离毒株之间的相似性为98.6%～100%;分离毒株与国内外参考毒株的相似性为97.4%～100%,与疫苗株Pfizer/vaccine/06的相似性为98.3%～98.9%。扩增序列的推导氨基酸主要在第5,297,370,426,440位发生变异。在55株分离毒株中,有32株为New CPV-2a亚型毒株,20株为CPV-2c亚型毒株,3株为New CPV-2b亚型毒株。55株分离毒株形成3个主要的流行分支,与国内参考毒株的亲缘关系较近,而与国外参考毒株、猫细小病毒的亲缘关系较远。说明New CPV-2a、CPV-2c、New CPV-2b亚型毒株在广西地区流行广泛,正逐步取代CPV-2a...     

水貂卡他性胃肠炎及其防治

<正> 水貂卡他性胃肠炎是水貂胃肠粘膜的一种表面炎症,主要表现为胃肠分泌、运动机能紊乱,粮液渗出和粘膜上皮细胞变性。由于食物通过胃肠异常发酵变酸,产生有毒物质,这些产物刺激胃肠粘膜,呈现毒害作用,引起水貂拒食和呕吐。本病呈慢性经过,但不出现腹泻症状,易误诊为其它疾病影响治疗,最后导致死亡。     

犬圆环病毒病研究进展

自2012年美国首次报道犬圆环病毒(CanineCV)以来,随后欧洲、北美洲及亚洲等地区陆续从腹泻犬中发现该病毒。犬圆环病毒可感染不同年龄段犬,尤其以幼龄犬感染率较高。该病毒可以感染狼和獾等食肉动物,经常与犬细小病毒发生混合感染,造成犬的出血性腹泻。犬圆环病毒(CanineCV)与其他肠道病毒协同作用,加重胃肠道疾病。然而对于犬圆环病毒病的研究还没有完全深入,论文就目前已知犬圆环病毒病的病原特征与致病性、流行病学、诊断等方面的研究进展进行概述,为犬圆环病毒的研究提供参考。     

猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×109~8.80×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×101 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。     

金刚烷胺抑制乙脑病毒感染引起小胶质细胞炎症反应的作用

目前金刚烷胺被(amantadine,Ama)用作一种抗病毒和抗帕金森药物,可抑制小胶质细胞的炎症激活。为验证金刚烷胺是否会抑制乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染小胶质细胞所引起的炎症反应,本试验利用Ama处理小鼠小胶质瘤BV-2细胞系后使用JEV感染细胞,测定细胞中炎性因子的表达,并与单独使用JEV处理BV-2细胞组进行对比分析。结果表明,Ama可以显著降低JEV感染引起的5种炎性因子的表达,MCP-1(62.17%)、IL-6(62.07%)、TNF-α(59.67%)、IL-1β(63.16%)以及IL-10(34.24%)。本试验为流行性乙型脑炎的临床治疗提供了理论依据。     

羊凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α实时荧光定量检测方法的建立

为探讨羊痘病毒感染后机体的凋亡细胞因子mRNA表达水平的变化,深入探讨羊痘病毒免疫机制,本研究设计针对羊凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α特异性引物,建立羊凋亡细胞因子实时荧光定量方法。分别建立荧光定量PCR反应体系并进行优化。结果表明:Fas、FasL、TNFR1和TNF-α的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰。组内变异系数均小于2.00%。本研究建立的羊凋亡细胞因子SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法为凋亡细胞因子mRNA表达水平提供了技术平台。     

C5a对类风湿关节炎小鼠嗜中性粒细胞的募集作用

通过使用双光子显微镜活体成像技术优化了K/B×N血清诱导的关节炎小鼠模型,并观察了嗜中性粒细胞的募集情况。皮下注射K/B×N血清可以快速诱导大量的嗜中性粒细胞募集到局部炎症关节。通过使用这种方法,发现阻断C5a活性会减少嗜中性粒细胞募集,说明C5a是关节炎期间嗜中性粒细胞募集的关键调节因子。因此,本试验将为补体相关生物制剂治疗类风湿关节炎提供新的靶点。     

林业建设中营林工作存在的一些问题及措施

最近几年我国的林业经营提高到了一个新的高度,不论是精力还是财力都比以前林业经营倾注的多,而且采用了一系列方法进行林业建设,比如:树木种植、退耕还林等措施都在如火如荼的进行着。但是在林业建设的过程中难免存在一些问题,有些问题严重的影响了我国的林业建设发展,对我国的营林工作有着一定的阻碍。本文将结合重庆黔江区国有林场在营林工作中发现的问题进行分析探讨,针对营林工作中存在的问题进行分析和解决措施,以便为以后的营林工作创造有利的环境。     

2014年广西部分地区常见猪群疫病感染情况监测分析

为探明2014年广西猪群主要疫病的感染情况,本研究从发病猪场和屠宰场采集猪组织样品共325份,应用RT-PCR方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV),并应用PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)。结果发现,发病猪场中,这5种病毒感染率分别为12.00%、28.57%、19.43%、53.71%和9.71%,而屠宰场的感染率分别为5.33%、2.67%、5.33%、59.33%和11.33%。对猪群混合感染情况分析发现,PCV2和其他病原的混合感染率最高。其中,发病猪场二重感染最高的为PRRSV+PCV2,达到11.43%,其次为PEDV+PCV2、CSFV+PCV2和PCV2+PRV,阳性率分别为5.71%、4.00%和4.00%;三重感染率最高的为PRRSV+PEDV+PCV2以及PRRSV+PCV2+PRV,阳性率均为2.29%。屠宰场二重感染最高的是PCV2+PRV,达到3.33%;三重感染最高的是CSFV+PCV2+PRV,阳性率为0.67%。结果表明,在发病猪场和屠宰场中,PCV2的感染率最高,且常与其他病原发生混合感染,PRV感染率呈上升趋势,加强对这2种病毒的监控对控制广西地区猪群发病具有重要意义。