兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定

为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Westernblot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位。结果显示,5D11能抑制病毒凝集人“O”型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494aa-579aa区段。成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础。     

人组织蛋白酶K在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

在动物和人的骨代谢疾病中,组织蛋白酶K是木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶,是负责骨吸收过程中溶骨的主要关键酶,是新药物的分子作用靶点。通过毕赤酵母表达系统表达出重组组织蛋白酶K,进一步用离子交换和分子筛系统进行纯化得到高纯度有活性的重组组织蛋白酶K。运用FluStar荧光酶标仪测定390 nm(激发光)和460 nm(发射光)波长下荧光强度的变化并计算出组织蛋白酶K的酶活力为119.6 U,为进一步筛选骨质疏松等骨代谢疾病的新药提供参考。     

PKR基因表达高效阻断Marc-145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响

研究猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)在Marc-145细胞蛋白激酶R(interferon-induced, double-stranded RNA-activated kinase, PKR)下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照,合成后插入pSilencer^TM 2.1-U6载体构建重组质粒,与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞,以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞,潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系,感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等,研究此状态下感染特性。结果显示筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系,重组病毒感染后48 h, M蛋白与EGFP表达均受到抑制,且...     

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定

为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Westernblot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位。结果显示,5D11能抑制病毒凝集人“O”型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494aa-579aa区段。成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础。     

Ⅰ群禽腺病毒及其疫苗研究进展

1987年以来,禽腺病毒(Fowl adenoviruses,FAdV)在世界范围内感染普遍。2015年,我国山东省首先爆发该病毒引起的疫病,之后各省市地区相继蔓延流行,给养禽业造成了很大的经济损失,特别以心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)和包涵体肝炎(inclusion body hepatitis,IBH)造成的危害最大。本文主要将禽腺病毒的病原学、流行病学、临床特征研究及疫苗的研制等进展加以总结,以期为本病的防控提供参考。