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旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。通过检测绿色荧光强度分析RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的结合能力。结果表明,转录得到的RNA经过加热变性、缓慢退火后得到VC2RNA适配体和VC2/g20a RNA适配体,在125mmol·L~(-1 )KCl和30mmol·L~(-1 )MgCl_2溶液中孵育180min的优化结合条件下,VC2适配体与c-di-GMP特异性结合,VC2/g20a适配体与cGAMP特异性结合;c-di-GMP对VC2适配体的半数效应浓度(EC50)为(89±1.7)nmol·L~(-1),cGAMP对VC2/g20a适配体的半数效应浓度为(309±4.5)nmol·L~(-1);VC2和VC2/g20a能够分别检测低至5nmol·L~(-1)和20nmol·L~(-1)的c-di-GMP和cGAMP;并且发现转录的RNA混合物在未纯化的情况下同样能够检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP。这种方法可以简单快速的检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且为研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潜在可能。 相似文献
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本研究对实验室合成的一种用于治疗动物腹泻的药物囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)抑制剂——类噻唑烷酮进行了毒理学安全性评价。将受试物通过灌胃给予试验动物,通过全身毒性试验、小鼠精子致变试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和Ames试验进行安全性评价。结果显示,受试物没有全身急性毒性;在体内没有对生殖细胞致突变作用;不会对染色体和细胞有丝分裂造成损伤;没有诱变性。本研究为进一步将该类噻唑烷酮应用于治疗仔猪腹泻提供可靠的试验依据。 相似文献
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