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口服鸡新城疫V_4株病毒免疫效果研究夏平安①侯安祖②李宏基③摘要经嗉囊接种108.5EID50鸡新城疫V4株病毒。后第4~8天,能从粪便中分离出病毒。5周龄鸡拌料一次口服108.5EID50鸡新成疫V4株病毒,半年内HI抗体平均效价为25左右,用10?.. 相似文献
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根据口蹄疫病毒(FMDV)与猪瘟病毒(CSFV)基因组序列高度保守区,设计合成2对引物,以CSFV和FMDV培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性片段扩增,扩增片段大小分别为200 bp、141 bp.结果表明,扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致.通过特异性与敏感性试验,CSFV与FMDV培养物均可扩增至10-5倍稀释,最终建立的二联RT-PCR方法对上述2种病毒的敏感性亦可达10-4倍稀释,约10 pg的总RNA,证明本法对上述2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点. 相似文献
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参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株ORF5基因的克隆与变异分析 总被引:4,自引:4,他引:4
从河南郑州、新乡、周口不同地区猪场的急性病猪中分离到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproduc-tive and respiratory syndrome virus,PRRSV),分别命名为PRRSV Hn-1/06、PRRSV Hn-2/06和PRRSV Hn-3/06,细胞中和试验证实其血清型与美洲型一致。利用RT-PCR方法克隆了它们的ORF5基因,并对其基因序列和推导的氨基酸序列与7个不同来源的PRRSV毒株进行了同源性和亲缘关系比较分析,结果表明,3个分离株之间的ORF5基因及其推导的氨基酸均同源性均大于95.5%;与VR-2332标准北美洲株和疫苗株RespPRRS MLV间的同源性均低于与中国CH-1a毒株,而与流行的欧洲株间的同源性均低于54.5%。同时对推导氨基酸序列与6个北美洲型PRRSV株进行变异分析比较,证实其推导氨基酸序列发生了变异,特别是中和位点处第39位明显不同,表明河南省流行的PRRSV为北美洲型的变异株。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的单股正链RNA病毒,是目前引起猪繁殖障碍的主要疫病之一,临床上以母猪发热、厌食、早产、流产和产木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率为特征.根据抗原性差异和基因的同源性比较,一般将PRRSV分为欧洲型(原型毒株为LV)和美洲型(原型毒株为VR22332)两大类,病毒基因组大小约15 kb,包括8个开放性阅读编码框,其中ORF7编码的比较保守的非糖基化的核衣壳蛋白(N)具有较高的保守性,分子质量约15 ku,为病毒的优势结构蛋白,而且N蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,能激发机体较强的免疫应答. 相似文献
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转移因子与重组转移因子及其在疾病防治中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
转移因子是来自于免疫淋巴细胞的一类可透析小分子多肽,它能够将致敏淋巴细胞的免疫信息传递给未致敏的受体淋巴细胞。转移因子具有特异性和非特异性免疫活性,特异性转移因子具有转移特异性细胞免疫的能力,非特异性转移因子具有促进淋巴细胞活化增殖,增强其免疫活性,并可诱导靶细胞产生大量的细胞因子。重组转移因子是利用基因工程技术将编码具有免疫增强活性的转移因子基因,进行克隆和体外表达,表达产物经纯化制备而成,试验表明其具有增强细胞免疫活性的作用。转移因子和重组转移因子是一种具有免疫增强活性的新型高效安全的生物药品,在临床上用于疾病的防治,具有广阔的应用前景。 相似文献
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取0.5mlBHK-21新鲜健康细胞液和0.1ml狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合,培养24h制片,加抗狂犬病病毒兔抗体感作,用驴抗兔荧光抗体染色,通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿色结构判定病毒是否在细胞内增殖,从而建立了检测狂犬病病毒快速荧光技术法(RFAT)。并用RFAT检测了15批Flury-LEP株培养液,15批ERA株培养液,和15批鹿毒8202株培养液,TCID平均滴度分别为5.68、6.05、4.86,并同时进行了小白鼠脑内接种平行试验,MLD50平均滴度分别为5.50、5.65、4.25。从试验结果看,RFAT是取代MLD50测定法的理想方法 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病复合PCR诊断方法的建立及应用 总被引:5,自引:0,他引:5
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(ATCC VR-2332)的部分ORF6及ORF7保守序列和已发表的猪圆环病毒株PCV-2(DQ195679)的ORF-2基因保守序列,设计合成了2对特异引物,分别扩增出大小为426 bp和631 bp特异性基因片段,通过优化RT-PCR和PCR条件,最终建立了可同时检测PRRSV和PCV-2的复合PCR诊断方法。应用此方法分别对河南省不同地区送检的15头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果8头份PRRSV阳性,5头份PCV-2阳性,其中3头份PCV-2和PRRSV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRRSV和PCV-2复合PCR诊断方法具有高度特异性和敏感性,可用于兽医临床诊断。 相似文献
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夏平安 《郑州牧业工程高等专科学校学报》1995,(4)
应用鼠脑传代,从具有神经症状的病牛脑组织中分离获得5株病毒,经电子显微镜观察呈典型弹状病毒样粒子.用抗狂犬病毒CVS(狂犬病毒Ⅰ型代表株)免疫血清作ELISA检测及小鼠中和试验,证明分离株病毒为狂犬病毒.用狂犬病相关病毒Lagos bat(狂犬病毒2型)、Mokola(狂犬病毒3型)和Duvenhage(狂犬病毒4型)免疫血清对分离株病毒作交叉中和试验,结果发现分离株病毒与Duvenhage有较密切的抗原联系.而与Lagos bat及Mokola病毒没有抗原联系.用自制狂犬病毒“核蛋白”单克隆抗体作夹心间接ELISA检测分离株病毒的感染鼠脑均呈阳性反应,5株病毒与CVS及其互相之间没有明显差异.结论认为,由河南省黄牛分离的病毒为狂犬病毒. 相似文献