新的柑橘叶斑驳病毒桑树分离株的基因组克隆及传播方式分析

柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)可侵染多种植物。2018年,通过对叶片表现为皱缩、变窄症状的桑叶样品进行高通量测序后发现,桑树中存在CLBV的侵染。通过RT-PCR、5′-和3′-RACE等方法确定了CLBV桑树分离株(CLBV-MA)的全基因组序列。CLBV-MA基因组全长8 617 nt(不包含3′polyA尾),共包含3个开放阅读框,分别编码复制酶蛋白、运动蛋白和外壳蛋白。CLBV-MA与其他CLBV分离株编码的复制酶蛋白以及外壳蛋白的氨基酸序列相似性分别为79.0%～89.1%、87.6%～94.7%,是一个新分离株。基于全基因组核苷酸序列的系统进化分析显示,CLBV-MA与CLBV-Actinidia、CLBV-HZ、CLBV-XL、CLBV-Actinidia-V20以及CLBV-ML聚类到一个分支,亲缘关系最近,并且CLBV-MA更为原始。根据桑树的繁殖方式、修剪管理方式、树龄以及CLBV-MA在桑园中的分布情况分析,CLBV-MA主要通过嫁接传播,也可以通过被污染的刀具传播,但传播效率低下。CLBV-MA全基因组序列及其传播...     

桑树皱叶病毒vⅡ变种侵染性克隆的构建及其致病性鉴定

桑树皱叶病毒vⅡ变种是对桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus, MCLV)进行遗传进化分析发现的，其对桑树的致病性尚不清楚。利用PCR和同源重组的方法构建了农杆菌介导的含有2倍大基因间隔区(large intergenic region, LIR)的MCLV vⅡ侵染性克隆，分别接种到其天然宿主桑树和实验植物番茄植株上，以期明确MCLV vⅡ变种对桑树的致病性及对实验植物的侵染性和致病性。结果显示，桑树和番茄分别在接种45 d和25 d检测到全部侵染成功的植株，说明构建的含有2倍LIR的MCLV vⅡ侵染性克隆具有侵染性；MCLV vⅡ的侵染性克隆可以侵染番茄，且草本植物番茄接种成功率和接种响应速度都要高于和快于木本植物桑树，说明番茄可以作为MCLV研究的实验宿主；接种后检测为阳性的桑树在90 d的观察期内，其叶部没有表现出病毒感染样症状，接种后检测为阳性的番茄在45 d的观察期内未表现出任何病毒感染样症状。这些发现为双生病毒侵染性克隆的构建提供了一种新的思路，并为进一步研究MCLV与寄主互作和MCLV的应用奠定基础。